Cell stem cell最新文章：Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming

xyklmu

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Cell stem cell Volume 8, Issue 4, Pages Pages 376-388 (8 April 2011)   # Q, m1 i1 L: i

: T" u2 x5 v% Q# e# _Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming of Mouse and Human Somatic Cells to Pluripotency* C8 I6 B' f+ o- O5 @  z
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; A  U3 \  N$ v$ i: wFrederick Anokye-Danso, Chinmay M. Trivedi, Denise Juhr, Mudit Gupta, Zheng Cui, Ying Tian, Yuzhen Zhang, Wenli Yang, Peter J. Gruber, Jonathan A. Epstein, Edward E. Morrisey
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Highlights
2 f; ~+ E0 ]; j- e5 C► miRNAs alone can reprogram somatic cells to pluripotency
; u- c. X. M2 H4 r* Q► The miR302/367 cluster reprograms both mouse and human fibroblasts
8 X- ]# C3 q5 b) _► miR367 is required for miR302/367 reprogramming 3 e5 g* Y- t$ P
► Low Hdac2 levels are required for miR302/367 reprogramming7 R3 V) M" K/ @
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1 k' @! z$ D# N# o' h2 S: T现将这篇文献及附件信息贴上，欢迎大家进行讨论。
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海洋注：本文跟帖中有很多不同意见 本文是否存在作假可能 欢迎大家参与讨论 发表自己的观点
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xyklmu

2010年Science杂志总结出的10大科技进展中，有关细胞重编程的描述：% I8 N1 g" X6 T0 t0 c

1 f% m- x) F8 J7 z. p% M1 RSouped-Up Cellular Reprogramming
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- d. x; g; K/ e& p7 ?% t, ?9 WChanging a cell’s fate by adding extra copies of a few genes has become routine in labs around the world. The technique,
4 `  d  r; V* S: j2 q9 J( X% Eknown as cellular reprogramming, allows scientists to turn back a cell’s developmental clock, making adult cells behave3 f+ s  w, {5 S5 N8 n3 j5 ]" H
like embryonic stem cells (see “Insights of the Decade,” p. 1612). The resulting induced pluripotent stem cells (iPSCs)' ?6 H- U0 B# j9 ]' s
are helping scientists to study a variety of diseases and may someday help to treat patients by supplying them with genetically
9 [4 f( g  A) c/ K/ B" c1 Imatched replacement cells.  w; r! X; H1 `9 p
This year, scientists found a way to make reprogramming even easier using synthetic RNA molecules. The synthetic RNAs8 ~/ q$ ]+ C2 a& n) R$ c* T
are designed to elude the cell’s antiviral defenses, which usually attack foreign RNA. The technique is twice as fast and 100 times6 l/ k8 t2 U& j2 o8 ~0 e& }: s
as efficient as standard techniques. And because the RNA quickly breaks down, the reprogrammed cells are genetically identical' ^% C1 |- T. C  z( J: a
to the source cells, making them potentially safer for use in therapies.+ j( c8 ]: k. u$ a5 m
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Early evidence suggests that the RNA approach reprograms the cell more thoroughly than other methods do, yielding a
' m% {5 K6 v0 Dcloser match to embryonic stem cells. The method can also prompt cells to become nonembryonic cell types. By inserting synthetic
/ d1 g7 X& @2 Z* \RNA into a cell that codes for a key gene in muscle tissue, for example, the researchers could turn both fi broblasts and iPSCs into muscle cells.2 w4 e) ~9 o: I& u3 w$ ^
编者对具有调控的RNA分子在细胞重编程中的作用的预言，这么快就实现了，呵呵，说不定就是文章的作者提前透露出来的消息呢。& p: y; S1 c0 S( Y7 ?# M

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markllq

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这篇文章中利用miRNA302/367 在除去SKOM的情况下直接诱导出iPS，而上个月中科院广州生物院裴端卿组在JBC发表利用miRNA302/367显著提高了iPS效率，两篇文章的区别就在有没有加四因子诱导，最后发出来的文章差别很大，国内科研在创新方面还是不够给力啊！" X+ t; B. h& i+ ]7 d
* t0 }6 d8 M! [& m
附上裴的文章：

xyklmu

1）两篇文章在如何诱导iPS产生的方法方面没有太大的区别，cell stem cell这篇文章用的慢病毒的方法，而裴用的逆转录病毒，后者在感染效率上会略输一筹的。所以前者的作者一直在强调诱导的高效性，两个数量级以上。. F  R8 B. E' C0 l+ l: a
2）纵观两篇文章，cell stem cell这篇文章在分析诱导出来的iPS表型marker上做足了功夫，包括including pluripotency marker expression, teratoma formation, and, for mouse cells, chimera contribution and germline contribution.这一点裴的文章似乎有点单薄，他们对MET似乎更情有独钟。/ z+ r, p% H+ e% Z
3）cell stem cell这篇文章还对miRNA302/367发挥作用时的协同因素Hdac的表达水平进行了分析，从调控的网络性方面更深入了一步，裴做的也不错，找到了miRNA302/367的靶标。
" b8 `  y3 }0 y5 N1 p0 T总体上感觉还是前者的分析比较到位也有深度，我们能够做出来同样的结果，在这一步上可能就有所不及了，个人愚见，呵呵
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snokey

* b9 U8 T' Z1 k4 D
5 M. M. n8 z% G, R% ]8 z
个人很不看好这篇文章，感觉too good too be ... 希望将来别的组能重复出来。
# V' y, Q0 d' M9 C8 E第一：做miRNA302/367的Lab太多了，用把这几个microRNA组合起来一起转染细胞，或者用载体表达整个microRNA cluster的工作很多人都做过了，我都知道一个很有Credit的（常有Nature level paper）的组做了好一阵了，没有得到什么非常非常明显的结果。2 F8 p3 I$ x, u; s" V! O, m/ B, I$ j
第二：关于ES-like 克隆的统计，按文章的统计方法来看，他们得到的人的细胞中的诱导效率差不多为10%（如果我没有理解错的话），我除了惊叹还是只能惊叹。
3 @: N; ~+ f- u8 F4 E* q& R* l第三：VPA的作用问题，VPA的作用其实很大程度上是HDACi-indepent的，个人觉得作者的工作只能部分解释MEF里VPA的作用。
3 [2 v5 ~" F2 h. O第四：现在最流行的就是virus-free系统，病毒表达miRNA302/367可以work，直接转microRNA进细胞不就是virus-free/OSKM-free了吗？
9 h1 F6 d% @2 v' p* Y1 |2 _第五：哈佛那篇靠合成mRNA高效诱导iPS的文章其实也有类似的问题（too perfect）。据我所知有公司重复了，结果很不乐观，实际上那篇文章真的很难重复。我个人一直有个很大的疑惑，关于Fibroblast转染的问题。众所周知，Fibroblast很难转，做过的人都知道，即使用优化的Nucleofection程序，转染效率不过50%，哈佛那篇用RNAiMAx（其实是弱化版的Lip2000）居然就可以搞定了？（而且是那么长的cDNA） 那样Lonza最有名的产品Nucleofector早就没有市场了。
4 J# m5 ~* i" g. r4 T- ]( u/ l9 }) z& v
个人觉得这篇文章值得借鉴的地方是找出了一些VPA可以提高诱导效率的解释。$ {- C9 r8 O# z2 Z
时间/重复是最好的判断标准，希望我的观点是错误的。

embryonic12

我们也试过哈佛的那个方案，很难重复，文献就是个文献，科研还得自己做

snokey

楼上的，你打算重复这篇文章吗？

ambassador

有这篇同一期的文献没？
% u# s* I) i" D; K5 G5 _Defects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Development of Cloned Embryos Generated by Somatic Nuclear Transfer
" @+ Z; }+ S' S- O' d+ g2 M- \Jiangwei Lin1, 2, Linyu Shi1, Man Zhang1, Hui Yang1, Yiren Qin1, Jun Zhang2, Daoqing Gong2, Xuan Zhang1, Dangsheng Li3 and Jinsong
5 x. f; m& v( L7 |3 [
; Y: j8 d/ L2 ?链接附上：http://www.sciencedirect.com/sci ... e8161f55c5940736b7e9 d; ~% W. y# M5 S" ?9 Y: D9 j' M& R

# i4 K2 y7 T/ |  ]5 f+ F各位朋友：帮忙下载一下！

xyklmu

回复 ambassador 的帖子# a- _5 t2 f# G# Z8 U/ R2 V9 P

( |9 j4 _* F. cDefects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Development of Cloned Embryos Generated by Somatic Nuclear Transfer 1 }; l5 n# Z8 E
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. T0 q. h9 O4 e8 W+ w& X. Y9 f  Y' e2 f
( r7 i! ~6 X' b8 i7 D( n. [4 E
下载好了，楼上的可以下载了' o3 h" ]) M' d" p6 C5 i" j

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ambassador

xyklmu 发表于 2011-4-9 23:01
1 J" G3 S- g* t3 j( V  k回复 ambassador 的帖子
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0 R: V1 j& v, u; T2 u* W/ D# t$ y) N6 FDefects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Develop ...

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谢谢啊！虽然同学发给我了。。。