Cell stem cell最新文章：Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming

xyklmu

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6 c' F& n/ Q' {! F! N8 q  S7 y, V8 B( rCell stem cell Volume 8, Issue 4, Pages Pages 376-388 (8 April 2011)   
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5 J. F5 N* A/ W& x) G  Q% N* S6 gHighly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming of Mouse and Human Somatic Cells to Pluripotency
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* W1 R" `( X' [0 BFrederick Anokye-Danso, Chinmay M. Trivedi, Denise Juhr, Mudit Gupta, Zheng Cui, Ying Tian, Yuzhen Zhang, Wenli Yang, Peter J. Gruber, Jonathan A. Epstein, Edward E. Morrisey$ a4 |6 z- s0 `' `+ ?% F6 K  ~

2 X; a7 x* d- X4 z7 ~) \% _2 F9 ]& H( pHighlights
" q7 H+ x( e3 D+ S' b( t► miRNAs alone can reprogram somatic cells to pluripotency
% h* w3 h# P+ @* q► The miR302/367 cluster reprograms both mouse and human fibroblasts
- t, b0 |1 y4 _" K► miR367 is required for miR302/367 reprogramming 8 U; s7 n) V5 T$ Y
► Low Hdac2 levels are required for miR302/367 reprogramming
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) [" a. y- a6 Q, C  _现将这篇文献及附件信息贴上，欢迎大家进行讨论。
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海洋注：本文跟帖中有很多不同意见 本文是否存在作假可能 欢迎大家参与讨论 发表自己的观点& y9 O2 g. z5 b; E. h

xyklmu

2010年Science杂志总结出的10大科技进展中，有关细胞重编程的描述：
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5 A( O# T+ K4 p# g" aSouped-Up Cellular Reprogramming5 p/ c' k# b+ }  |" v" w6 {
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Changing a cell’s fate by adding extra copies of a few genes has become routine in labs around the world. The technique,
0 Y9 l3 |$ {- Z% ^+ M' C% hknown as cellular reprogramming, allows scientists to turn back a cell’s developmental clock, making adult cells behave
/ e& E, D1 Y+ h# K1 B4 X0 u: ylike embryonic stem cells (see “Insights of the Decade,” p. 1612). The resulting induced pluripotent stem cells (iPSCs)
" |( C% n6 E0 K2 e3 pare helping scientists to study a variety of diseases and may someday help to treat patients by supplying them with genetically
8 \4 R+ o, a+ }, W2 tmatched replacement cells.8 C3 e5 U; m4 _; Z- _( S- R, t
This year, scientists found a way to make reprogramming even easier using synthetic RNA molecules. The synthetic RNAs* \6 ^" ]8 H. ]  w2 u0 q- Y
are designed to elude the cell’s antiviral defenses, which usually attack foreign RNA. The technique is twice as fast and 100 times. U6 M2 h9 o6 T; b' x6 ~* X
as efficient as standard techniques. And because the RNA quickly breaks down, the reprogrammed cells are genetically identical
- k* |9 G  F4 }to the source cells, making them potentially safer for use in therapies.
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Early evidence suggests that the RNA approach reprograms the cell more thoroughly than other methods do, yielding a
& J; \; j! g) y% J- N- vcloser match to embryonic stem cells. The method can also prompt cells to become nonembryonic cell types. By inserting synthetic
0 C. F% u5 G. C2 \( ^RNA into a cell that codes for a key gene in muscle tissue, for example, the researchers could turn both fi broblasts and iPSCs into muscle cells.8 O* c- h! E5 }  i
编者对具有调控的RNA分子在细胞重编程中的作用的预言，这么快就实现了，呵呵，说不定就是文章的作者提前透露出来的消息呢。6 P# j: t* n2 P8 k
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1 V- R1 D5 x% c& k! A这篇文章中利用miRNA302/367 在除去SKOM的情况下直接诱导出iPS，而上个月中科院广州生物院裴端卿组在JBC发表利用miRNA302/367显著提高了iPS效率，两篇文章的区别就在有没有加四因子诱导，最后发出来的文章差别很大，国内科研在创新方面还是不够给力啊！& Y( F# u5 s" E& R

7 N# T8 h3 ]6 S% Z8 f2 y附上裴的文章：

xyklmu

1）两篇文章在如何诱导iPS产生的方法方面没有太大的区别，cell stem cell这篇文章用的慢病毒的方法，而裴用的逆转录病毒，后者在感染效率上会略输一筹的。所以前者的作者一直在强调诱导的高效性，两个数量级以上。
% t5 r/ d3 C4 j) x6 Z+ X2）纵观两篇文章，cell stem cell这篇文章在分析诱导出来的iPS表型marker上做足了功夫，包括including pluripotency marker expression, teratoma formation, and, for mouse cells, chimera contribution and germline contribution.这一点裴的文章似乎有点单薄，他们对MET似乎更情有独钟。
8 f( K! c# I* V2 V* [3）cell stem cell这篇文章还对miRNA302/367发挥作用时的协同因素Hdac的表达水平进行了分析，从调控的网络性方面更深入了一步，裴做的也不错，找到了miRNA302/367的靶标。
7 ^/ r' C  ]+ s' ?总体上感觉还是前者的分析比较到位也有深度，我们能够做出来同样的结果，在这一步上可能就有所不及了，个人愚见，呵呵
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snokey

: l2 M/ D0 k5 l* z9 O2 a8 n) z8 v& Z
个人很不看好这篇文章，感觉too good too be ... 希望将来别的组能重复出来。
. ?4 y  ], x8 n6 k+ e/ O第一：做miRNA302/367的Lab太多了，用把这几个microRNA组合起来一起转染细胞，或者用载体表达整个microRNA cluster的工作很多人都做过了，我都知道一个很有Credit的（常有Nature level paper）的组做了好一阵了，没有得到什么非常非常明显的结果。: q$ U$ \9 J* O$ @0 s3 D
第二：关于ES-like 克隆的统计，按文章的统计方法来看，他们得到的人的细胞中的诱导效率差不多为10%（如果我没有理解错的话），我除了惊叹还是只能惊叹。
# V. B+ S% g; ^8 g* [. }/ k3 N第三：VPA的作用问题，VPA的作用其实很大程度上是HDACi-indepent的，个人觉得作者的工作只能部分解释MEF里VPA的作用。6 Q# [  o' C) V* d
第四：现在最流行的就是virus-free系统，病毒表达miRNA302/367可以work，直接转microRNA进细胞不就是virus-free/OSKM-free了吗？9 R' `8 C# ]  R( d# p" N( T# l
第五：哈佛那篇靠合成mRNA高效诱导iPS的文章其实也有类似的问题（too perfect）。据我所知有公司重复了，结果很不乐观，实际上那篇文章真的很难重复。我个人一直有个很大的疑惑，关于Fibroblast转染的问题。众所周知，Fibroblast很难转，做过的人都知道，即使用优化的Nucleofection程序，转染效率不过50%，哈佛那篇用RNAiMAx（其实是弱化版的Lip2000）居然就可以搞定了？（而且是那么长的cDNA） 那样Lonza最有名的产品Nucleofector早就没有市场了。  r0 O. h6 `% `* ]3 d  J

; m- a8 v$ {" E& l7 U个人觉得这篇文章值得借鉴的地方是找出了一些VPA可以提高诱导效率的解释。1 D! \9 k: h: C, A( M' G
时间/重复是最好的判断标准，希望我的观点是错误的。

embryonic12

我们也试过哈佛的那个方案，很难重复，文献就是个文献，科研还得自己做

snokey

楼上的，你打算重复这篇文章吗？

ambassador

有这篇同一期的文献没？
4 n" ]2 @1 Z! B  K# IDefects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Development of Cloned Embryos Generated by Somatic Nuclear Transfer 0 _  X. Y4 z# B: W( Q( E3 t# V
Jiangwei Lin1, 2, Linyu Shi1, Man Zhang1, Hui Yang1, Yiren Qin1, Jun Zhang2, Daoqing Gong2, Xuan Zhang1, Dangsheng Li3 and Jinsong
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9 F" Z2 j$ A% s$ f- w+ h& }1 L. O链接附上：http://www.sciencedirect.com/sci ... e8161f55c5940736b7e
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! Y- L3 `. p( p+ b2 j& t5 d8 L/ N各位朋友：帮忙下载一下！

xyklmu

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) @% r; e$ W6 n1 |+ G/ `Defects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Development of Cloned Embryos Generated by Somatic Nuclear Transfer + q4 N. N6 \& X; o+ g9 P7 b6 E
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( h$ @4 g# c3 Y2 _9 |9 l' I' \# Y/ l( x% Q8 n; `' |( `
下载好了，楼上的可以下载了# M' V2 i6 Q! \8 F/ [( S
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ambassador

xyklmu 发表于 2011-4-9 23:01 # F+ E3 r6 W, n7 M1 E
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Defects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Develop ...

9 U" b+ X; H. |+ A! j: q
谢谢啊！虽然同学发给我了。。。