神经干细胞培养死亡原因 求解 神经（附图）

huangfei2010

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小弟我第一次养神经干细胞，按照文献上的培养方法，需要DMEM/F12培养液，2%B27,EGF和b-FGF，20ng/ml,但是第一养细胞导师就让我只有DMEM/F12基础培养液，细胞开始几天还生长，形成细胞团，大约在7天左右，也就是第一次离心半量换液后，细胞开始大量死亡。培养过程中无污染，导师问起死亡原因，我告诉他说没有生长因子，不能长久生长，结果导师震怒说没有生长因子细胞只是增殖速度慢，也不会死啊。结果小弟被踢出实验室，回去面壁思过。（附注，我导师也没养过神经干细胞），求哪位高手能告知神经干细胞在基础培养液培养条件下死亡可能原因，附上几张照片，高手可以帮我看看那是不是神经球,谢谢大家！
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6 j7 H& L& {$ |海洋注：原图片较大，为保证浏览速度，做了修改 点击可看大图 作者原图片进行了压缩，有需要的胞友可以下载附件
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future007

我只是听我师姐说过一次，就是加了因子以后细胞也会大量死亡，到最后才会留下一些神经干细胞，你还是坐等高手解答吧

huangfei2010

回复 2# future007 : x; p7 V9 e, I8 |! R# }% c
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8 m# E3 |  A6 M% e) }. m    谢谢，我以前看过一些文献，说加了生长因子以后基础培养液就变成了条件培养液，有利于神经干细胞生长。

grape

1、没有生长因子细胞也不会那么快死亡。+ J, d6 S% V* k
* S. V+ I: C' l5 J( a6 j0 |3 O
2、我觉得是可能对细胞有物理打击, L. I+ X: n. C7 B. B
请问：; z5 g4 V8 A9 m. u4 W  h5 e
离心转速是多少？
1 H2 h9 ~  M3 l# F1 k7 w% F吹打时操作是否恰当？$ P6 ]( t. S( K6 p' C

! c$ h& t9 ?5 z( c3、图片不清晰，只能以文字描述进行判断

tommary

我觉得可能有几个原因：1、培养液pH值高了；2、血清浓度低；3、细胞密度低；4、分离的细胞本来状态就不好。

huangfei2010

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回复 4# grape
6 {) |/ r% w( {: k. h- \7 w- O
9 m; {: P/ N( S+ {, [( ~谢谢你提醒了我，我的离心转速是1000r/min,5min，离心前细胞还很多小的细胞团，离心后细胞成单细胞状态，培养几天也没有细胞团形成。另传2张细胞离心前后照片，请你看下

huangfei2010

回复 5# tommary   p: [. ?' q8 [6 b: A9 Q

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7 ]1 @5 X/ I* `/ e3 ?: O9 ?% Q- w    谢谢回复，在培养过程中因为怕干细胞分化，没有加胎牛血清。不过PH倒是没注意，请问你神经干细胞适合培养的PH是多少啊，如何及时调整pH？谢谢

军医

用KSR代替血清试试，不加血清肯定不行吧

huangfei2010

回复 8# 军医
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" h* M9 E* }& b: v' j谢谢回复，因为我是第一养神经干细胞，想看看神经球的形成，加了胎牛血清以后神经干细胞就分化了，不一定能看到神经球，所以及没加，可能也是细胞死亡的一样原因，刚查阅了一篇文献，在基础培养基条件下神经干细胞6天左右死亡，加了生长因子的实验组能正常生长。不知这是不是意味着生长因子是必须要加的？

军医

回复 9# huangfei2010
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    这个不清楚，我觉得血清是必须的吧，没血清细胞不都饿死了呀