神经干细胞培养死亡原因 求解 神经（附图）

guojingjing

回复 13# huangfei2010 4 G9 z' M2 m! w3 P; v

4 C2 O# y- ^* D, k: @% w& g
; b; c% ^: P+ s' t- C! C+ C2 S% n4 U. N    机械法是比较通用的方法，有文献认为机械法好，但是我发现机械法实在是费时费力，尤其在用单细胞做实验时很多时候无法真正把细胞吹成单细胞悬液，会影响实验，可以试试低浓度胰酶（0.0.25%）或sigma的accutase，很好用。另外nature protocol上也用了Tryple，是一种胰酶的替代物

huangfei2010

回复 31# guojingjing 8 y: d( ~1 @& W( z: U7 c
. K% f6 p! }+ s5 ^
( F6 u% j3 \/ I8 f0 [; y1 ~  y
    谢谢回复，请问是不是0.25%的胰酶啊，作用多长时间呢？

xfyang2007123

因子肯定要加啊，否则没营养怎么行呢。只有培养基没因子的话肯定不行的。另外你是取的原代细胞，还是直接用的细胞株？原代细胞需要培养几代后才可能稳定生长。你再培养几天看看吧，别那么轻易就扔了，你的神经球很漂亮啊。我要是能弄出你那么好的来就好了。加油！

huangfei2010

回复 33# xfyang2007123 - E. n; g7 [8 L1 }# q$ O
谢谢啊，我用的是原代的，因为没有细胞因子和B27，神经干细胞养的不好，都死了，现在准备重新养

dingyx2009

干细胞的大量增殖就要加生长因子，促进增殖抑制分化，。当去掉生长因子，细胞很快贴壁，并分化。与加不加血清没太大关系。再者，血清中有许多不确定的成分，有些特殊生长的细胞就主张用无血清培养基，长得很好，如neurobasal+B27等。

meirongwan

不是污染细胞球离心后打散了继续培养球又会出现

lujn100

回复 9# huangfei2010
& ~  Z( c7 @  K& m9 w; m
" |4 s! A' f$ X! P% B5 h
0 I1 \4 w& z& [% H    神经干细胞培养时是不加血清的，基础培养基里加b27就可以了

huangfei2010

回复 37# lujn100 1 y8 J2 D  k. D( n6 ~8 k5 C0 E: h
9 W! \& j  X6 a3 G" V8 c! `

9 B. D9 H9 E& w% u, }0 T# D! `    不加生长因子也可以吗？

beidouhan

得加血清啊，离心是800,5min吧

huangfei2010

回复 39# beidouhan ' u: i1 s5 [$ _* ]& H. l
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, u- [7 p1 v* p    加血清，神经干细胞不就分化了吗？