CIK加液后产生絮状物，大家来分析一下原因！！！

lyj-0017

CIK细胞起始阶段生长良好，细胞集落较多，但是在加液之后，细胞集落变大，并且聚团较大且有部分集落贴壁，后续培养过程中便会发现培养袋中出现絮状物，以至于后续培养过程中一直存在絮状物，细胞也死亡较多，不知道大家有没有遇到过这种情况？是我加液的问题还是别的什么原因导致的呢？

jenvy121

你的液体是否为无血清培养体系？如加了血浆，血浆是否灭活？血浆里面未灭活的补体可能会对细胞的生产产生此类作用。
3 O2 }5 m  n* E* ~# r1 I如是无血清培养体系，那么培养液使用前是否预热，会不会是低温产生的应激导致细胞出现此类状况。

三月桂花香

操作过程中是否被污染了？或者你的 培养基是否被污染，絮状物是不是真菌类污染可能性大》？

lyj-0017

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' _7 ?. _* o' S5 U9 m' m7 ?
9 p8 Z* a1 D: q$ w/ t我们用的是无血清培养基，培养基在使用之前是放在室温下平衡，但是室内是开的空调，温度也就23度，我也怀疑是温度的问题。9 a+ S9 d  Q' B" k3 G# Y3 v. P0 D
至于你说的预热培养基，应该是放在37度孵箱中还是37度水浴中呢？我曾经把培养基放在37度孵箱中，但是拿出来之后发现培养基颜色太紫，应该就是培养基pH值偏碱了吧，这样也会对细胞生长不利吧？不知道你们是如何预热的呢？

流泪的鱼

先排除污染，如果倒置相差显微镜下观察团块是树枝状的，就是真菌污染。培养基是第二天变黄，非常黄就是细菌污染。也可以去培养液送到医院的检验科，做细菌培养和真菌培养。% K; V, h2 h. k
如果不是污染，就是死细胞，死细胞会释放DNA，缠绕其他细胞，形成团块。那么，在判断细胞是如何死的。是不是操作不当？是不是换了新牌子培养基？是不是温度和CO2的问题？细节很多，你要一一排除。

lyj-0017

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7 D* ]  C- J6 ~, k) W
( z6 i0 e8 S+ C( M1 t不像被污染的样子啊，等我上图

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子  [. A! U/ l& Q2 [' c6 T
$ S" Z' ^3 w1 S4 D3 s1 [4 _; m# T* h
一个解释是，细胞受细胞因子刺激过度，有些患者的细胞不太能耐受细胞因子刺激
; q$ U) N7 ~4 i/ @$ b, E& Z还一个解释是，自体血浆没有灭活
5 k2 u0 x8 h  X+ h9 S0 q; d  h* A, Y; {
还有，培养基预热的话，可以扔培养箱也可以水浴，不过我不太建议用37℃，25℃就可以，我个人的经验是觉得37℃对培养基里的成分损失比较大. M1 L; z. k6 N
+ N% d$ t% R8 _" G
以上都是个人意见，望有高手点评

lyj-0017

回复 流泪的鱼 的帖子% z5 Q9 l. ?- v3 I5 k. u( j
1 ~: m' g& y1 X* H
现在来看的话，可以排除污染，我还是能够分辨清楚是否发生污染的。
$ p5 s7 |! U% k  I所以现在认为是细胞死亡，具体原因还需要进一步排查。培养基一直是没有改变，CO2和孵箱温度也不会有问题；至于别的不当操作嘛，我现在认为有两种可能，一个是培养基温度，一个是添加的细胞因子浓度，还有别的因素不？请帮忙提供参考一下，多谢啦~

lyj-0017

回复 sunny.yc 的帖子1 [# M- e/ }8 h3 k+ M
4 `  K( Q  l4 |# z7 C5 d
我现在也怀疑是细胞因子的问题，可能对于有的病人过高，因为前面的病人养得也还是不错的，你认为哪种因子的浓度过高会对细胞不利呢？IFN-r? OKT3?抑或是IL-2？
$ T( f1 G, H' N2 N/ K- i培养基预热这个问题，我赞同你的说法，但是，我发现，将培养基放在孵箱中预热，培养基颜色会变紫，这是否意味着培养基pH值偏碱了呢？这时，培养基温度倒是提高了，但是pH值也同样升高了，这对细胞也同样不利吧？
/ a8 i7 b# @7 _& Q用水浴是不是会更好一些呢？

lyj-0017

上两张图片，大家看看再分析一下