CIK加液后产生絮状物，大家来分析一下原因！！！

sunny.yc

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" u/ U+ ^+ n7 Y如果实验室有HH-1的水浴锅，那1L的培养基瓶子正好可以放进去，培养箱不太好，因为培养基瓶子也不一定干净，你不能保证你的冰箱就完全无菌吧，如果带进培养箱反而不好，弄不好污染了培养箱里的细胞，而且水浴锅水导热也比空气快，所以还是水浴锅吧。3 j6 p8 Q9 D. q7 I& `
培养基变紫这个问题，在培养箱或水浴锅都是一样的，因为你都是瓶盖拧上的，所以，没啥区别，再说培养基也是个缓冲体系，酸碱度变化不会很大的。( d2 H2 i: w% _( M$ P

2 H6 [. u; Y, d' Q* M0 L还有，我觉得，有可能是IL-2，最近翻了一下Rosenberg主编的《癌症生物治疗——原理与实践》，里面有几句话对IL-2的描述是这样的——鼠剔除IL-2后，可使T细胞过度且无法控制地增值，因而提示IL-2不是T细胞在体内生长的必须因子，而是T细胞凋亡所必需。

lyj-0017

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4 v7 i: u1 c. \8 v8 _' e+ v$ I! f4 w; r) b* H; A. ]
预热这个问题，我发现水浴应该是比放在培养箱中要好一些，至少培养基pH值没发现有什么明显变化。你说的培养基瓶也可能将细菌带入培养箱中不是没有可能，应该注意！3 f5 J, N5 t1 X% L9 V
: L2 x8 a: e* m2 a
对于CIK的扩增来讲，anti-CD3单抗和IL-2是必需的，IFN-r和IL-1可增强CIK的细胞裂解毒性。所以我认为出问题的可能是前二者，不知道你们用的终浓度是多少呢，我们的分别是100ng/ml和2000U/ml，你觉得浓度高吗？

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子' x# k7 c5 y. c" N
9 Y7 R7 q# W1 C# }, q$ x# q
你试一下100ng/ml和1000U/ml吧，2000U/ml的IL-2实在是有点高了，大多都是300U到1000U，2000U我也是第一次听说
, Y8 Q! P% w; T' x6 `! c  c: S/ t$ f2 L& b+ L1 @2 a
不过，如果你现在才更改浓度，对于这份细胞来说，我觉得意义已经不大了，不过在对以后的实验肯定是有帮助的，2000U/ml，有点太高了

sunny.yc

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) O4 [) C' Y1 ~6 I' \4 E7 y0 C" N
还有就是，CD3单抗也只是前期才用到，所以，对于之后的扩增影响不是太大，而且单抗一般都是作为前期一次刺激就可以了; g" Z, Z7 n" ]- k( Z3 {
0 M0 f# N1 J  i: ~5 i
你不会一直在添加单抗吧，呵呵

lyj-0017

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7 n- J) `% ?+ m' O( Q4 _1 S
$ ]  y5 r0 G& G! o* \我们用的IL-2是国产的临床注射级别的，国产的一般效价一般都比较低一些吧，你们用的是国产还是进口的IL-2呢？国产的用2000也算高的了吗？
* |  e* [+ J) X1 Panti-CD3单抗只是前期加，后期也是不加的。
; g! j. v% t% L0 c# S5 V1 r目前来看，可能就是这两种因子的浓度过高吧

sunny.yc

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, b- w) Z* N" \. zIL-2基本上都是用临床级的，试剂级的太贵了
9 y# q8 L4 v) m3 C6 b& BIL-2你先试一下1000吧，基本上都是这个使用量的
- P1 u) e1 n6 Y! c' D( ]% o8 u- X: h8 H9 y- H, C: C, z
CD3单抗也不算高，如果你只是前期加，100ng/ml 应该问题不大，我做的培养体系也是这个浓度，基本上没有什么问题

刘艳85

请问你用的是什么培养基？这个不是细菌污染，是不是细胞密度过高得不到营养而死亡导致的问题呢？

lyj-0017

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5 V" [- Q; D4 P; v6 ~
  G% E3 x  V- d( Q; ^) w2 H另外一个就是IFN-r，这个应该如何加呢？是在加抗CD3抗体前24小时加，还是制备当天与抗CD3抗体一同加入呢？加入的浓度应该多少呢？2000U/ml算高还是低呢？

lyj-0017

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* U5 R7 v3 ]1 z9 o/ ?. A* ]2 T7 K! ~9 u5 r
用的是AIM-V ，如果是细胞密度过高的话，你认为培养袋中的细胞密度应该为多少比较合适呢？现在就是一直在找集落聚团的原因，你们以前遇到过这种情况吗？是如何解决的呢？

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子" `- Q, g- p. Q7 _& j) I

: B: O) _" d& B& s4 e' e你的量是从哪看到的，都太高了吧，试试1000单位的干扰素γ，D0天一般只加干扰素