关于油红O染色

feiyang

请教大家！我做MSC诱导分化为脂肪细胞的油红O染色。1.在油红O加三蒸水3：2稀释后，没有通过定性滤纸，而是通过70um过滤篮过滤，然后静置，可是染色结果不好，看起来好多脂肪细胞并没有染上色，而且还是有不少杂质。2.一定要淡苏木复染吗？我没做。

glysh

hah 太巧了，我今天刚了油红染色，效果还不错。
. l' Y, k) C" P3 w% O第一，没有滤纸的话，可以用口罩过滤；一般没有上色的很有可能不是脂肪细胞；7 I* l8 ~# {& l; v' [* O1 ~, |! j
第二，不需要苏木素复染

regene

呵呵，同意楼上，不过滤问题也不大，但最好过滤以去杂质。: p1 [) m* o1 |5 Y4 l- y$ u: x
即使不染色，脂滴在光景下也是很容易分辨的。

luoziwei

是的，显微镜下就能观察到油脂滴的

tangyvhuang

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤7 K* x' S" `* A
油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释
2 I% `' D( y. @2 |& X' l4 W脂肪细胞的油滴很明显的
$ ]: F& K; t/ m1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.. W" f3 f( k, W4 w+ v! i( H
2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。
' K4 t$ I6 C7 C, n8 ^3，60%乙醇分色，# m, Z; [# Q& B, w) {7 p' _' r
4，苏木晶复染
' v. a; K1 n5 V0 r7 K5，水冲洗至变蓝。
  P2 G# ]! ]1 c- U

feiyang

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

glysh

回复 feiyang 的帖子
5 C2 ?' c7 ]! q
# c$ T6 g% @7 Y& C# q1 M很有可能是空泡！

碧海蓝天

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态,# a+ m) Z% u" U; J  [$ `* ]1 Z
我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野.
8 {- A! A, f' J3 Z另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,: T" t" s: e* a. K) R/ k
还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

feiyang

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

maxiaona

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。8 J7 |/ W5 Q3 s5 ^
2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。
: w3 m# C% l6 ~, s3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。
) M6 `; p/ V2 B8 ~1 a- |8 s$ X4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。- D! ^; L, S+ H' w6 P: }& S