关于间充质干细胞培养的一点经验

sdwzg119

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' j' L4 @0 d: f( O多谢~我计划去除胰酶观察一下~之前不去除至胰酶是顾虑离心对细胞有影响~

Learner

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" t8 D/ d  ?. m$ w回复 dwl1209 的帖子6 N2 u4 ]+ ~. j2 x  r
: q$ D- r% n( I0 L8 J- }) X
我不知道你们传代后是否换培养瓶，我是不换的，有时需要会增加新瓶。胰酶二次消化只是想不让那些耐胰酶的杂细胞在传代后继续扩增增殖。否则每次消化都会有一些顽固细胞消化不掉，也影响细胞均匀贴壁铺满。bFGF是帮助其增殖和维持干性的。

yang179

胰酶存在对细胞肯定是不好的。但是离心也会造成细胞的机械损伤。我们现在的做法是：消化的差不多的时候，把胰酶去掉，这个时候残留一小部分胰酶在培养瓶底部。然后添加新鲜培养基中止（此时，培养瓶中残留的胰酶量是很少的），稍微一吹细胞都会下来。然后根据密度或培养经验直接分瓶培养。对于细胞培养工作较大的实验室，可以节省时间，更重要的是细胞受到的机械损伤避免了。

zgzjhzxyj

yang179 发表于 2011-7-20 23:36
: d( `: o, t) Z  A: E  l* r- y, M; i胰酶存在对细胞肯定是不好的。但是离心也会造成细胞的机械损伤。我们现在的做法是：消化的差不多的时候，把 ...

: i, l& |& N+ ]6 [8 q) t" s
正解！

jss667795

回复 Learner 的帖子! O! {9 _$ _3 t( [+ Z/ L

+ M& \6 S: y. m' x# m请问你离心的转数和时间大概控制在多少最合适呢？

wangyimei

培养人的干细胞一般都加bFGF，它可以抑制干细胞的分化，促进干细胞的增殖；
" v- G* m8 r& v至于在消化细胞的时候是否离心去除胰蛋白酶，还是要看胰蛋白酶配制时是否加有EDTA，如果没有加EDTA就不用离心，直接加含有血清的培养基终止消化即可；如果加有EDTA,ZE

wangyimei

如果加有EDTA,则要离心去除胰蛋白酶和EDTA,要不然EDTA会影响细胞的贴壁和状态

beginner

我和楼主方法差不多，不用bFGF和EGF，但是也脂肪肝细胞只能传到8代左右。我同导师同学做真皮间充质干细胞，用bFGF和EGF能传到20代。

taxuewuge

回复 yang179 的帖子3 x' }- [$ I" J1 u/ R% R
0 \3 ]; ~5 E7 D) W' g! c
请问去掉胰酶的时候会不会也把消化下来的细胞丢掉。第一次要消化多长时间？谢谢

taxuewuge

回复 wangyimei 的帖子; w; U) k0 ~3 {  ?
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请问加BFGF会不会导致干细胞向血管内皮细胞分化啊？