贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：
! @" S1 I) O9 u7 h, f一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。  Z8 X' u0 |9 l& y$ C) S1 j
二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。
7 N& O# g: d: G5 z7 f* @/ n( z- Z% M# ^/ `& {$ D  j. ~
问题1：
! }% f6 p- P0 _网上看到的脐带结构的说法是否准确？
1 _2 w& a- a: r- ~7 E问题2：
: H. C# f, j9 \6 b1 ^处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？, `8 m( Y& K# u1 B( T
问题3：
& D+ S& t. B. \/ d! ^) K/ l9 `里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？
  i3 Q  _" ]* W) H: E( v问题4：
8 W4 X" b8 B+ [- ~一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？3 C3 D. C8 D2 S  B" I, K

wuhuaguo88l

问题1：网上图片还是比较准确的
2 q" a9 G! B3 Y8 z) ^5 k. z问题2：一般是要去除羊膜的
* H" E& ~2 x# O: I) z问题3：去除三根血管和羊膜后，剩下的都可以用来做原代' T# l/ {" ^3 K0 N9 P
问题4：剪刀剪碎比较方便，手术刀貌似不好用。

haibara007007

1：结构非常准确，就是这个样子
. m4 F5 c2 k/ l! u$ L& G7 g0 T/ |* U2:去除比较好，不然细胞会有一些显上皮状2 t% D1 U- S$ D3 G
3：可以不去除5 E2 Q/ q6 B/ A  \* }
4：一般都是用剪刀，区别的话，这个还真没做过

chuanbaozang

同意楼上几位的回答

fuyinsheng

1、结构没有问题
3 T" f" b% K) m- B2、一般需要将华通式胶单独分离下来，以确保细胞纯度，因为羊膜上皮细胞生长条件与间充质相似，已造成混杂
1 d( Q* |$ _  p, t5 W$ @) G3、去除血管的同时尽量将残留的血管壁等杂志从华通式胶上分离下来% |/ y% }; M9 P* u+ P
4、刀切的组织块相对较大，降低了细胞爬出的效率，剪刀更细碎一些

月_幻影

1.结构正确；* }1 E1 j2 A) `) T$ d6 h
2.做原代一般建议剥离羊膜；
& a: V3 }7 T0 X' S: p) I* D3.我们做的时候一般是将脐带剖开，去除三根血管然后直接用镊子从羊膜上往下撕华通式胶；
. Y) v0 f6 |1 z8 a, W9 x) e; R4.通常使用剪刀剪碎后铺瓶培养，用刀切似乎不太方便也没有剪刀剪得碎。

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子4 G; c: Z- q8 r4 x0 w9 w0 n

7 w& ~5 ^, `: ?0 c& Y我刚做时间不长，羊膜和华通氏胶有些分不太清楚，请问羊膜厚度大概有多少？

fuyinsheng

回复 jifengtang 的帖子0 r9 r9 }% w) `( O( H
1 L9 x4 ?5 Z4 H8 M+ c( u/ t$ ]5 u
羊膜非常薄，百十微米左右，最外面一小层

小豆芽

1、结构式正确的；
4 V- b4 \% `4 \; e% R' j2、在组织块贴壁培养时，一般是需要剥离羊膜的，这样可以保证细胞的纯度，同时也有利于细胞爬出；/ Q" l- y" x& _6 A2 C, w- n) k4 o
3、最好是能够去除，当然不去除也不会有太大影响，可以进行原代培养；
* ~- [* l$ N9 l* \0 t- \1 H2 `: I4、用刀切的话，操作不如剪刀方便，而且刀切组织块比较大，没有剪刀剪得碎。

redmaple

为保证细胞的纯度，还是要剥离；, h& `( W- @+ D7 o4 M& l# d
不剥离，杂质太多，影响细胞的生长