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贴块法培养MSC,脐带的处理若干问题   [复制链接]

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楼主
发表于 2015-11-3 21:42 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
最近一直在培养脐带间充质干细胞,对于脐带处理流程有些问题需要求教一下:6 W. h" |( f3 L8 Y, L
一、首先我想问一下脐带的结构,看到网上有一些说法,脐带最外层是羊膜组织,再里面是华通氏胶,再往里是比较松软的结缔组织,里面包裹2根动脉一根静脉。
0 f# r$ ^" ?9 y/ ]9 ^) s8 D9 k% U二、我处理的流程:是把脐带冲洗后剪成小段,除去血管里残留的血,将脐带从中间剖开,去除静脉动脉和结缔组织,用手术刀切成2mm3的小块,然后贴块,培养瓶先用血清润洗。
; u4 D0 p& z: `
: v( O$ b+ C" G2 @1 T- F问题1:
3 |# l& @, m' f5 A网上看到的脐带结构的说法是否准确?
" t/ j! d! X0 u% r+ n; X# W问题2:; O2 S+ n+ X' Y* K' i/ w3 n) Q
处理时不剥离羊膜,原代细胞爬出影响有多大?* L7 f# H9 K* `" g
问题3:0 M# I5 U" C; P; D* O6 n1 R" @
里面的结缔组织是否需要去除,如果去除不干净会有什么影响?
5 A. G' H; H; [1 N1 @; y4 A问题4:
7 ]; Y  A1 j$ Y# m, t5 W3 Z一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶,用手术刀切成小块有什么不一样?
0 Y- X/ u' k6 I, z$ l0 w6 e
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沙发
发表于 2015-11-4 11:46 |只看该作者
问题1:网上图片还是比较准确的
) m, N  q) N6 @$ L5 e7 g+ }9 z问题2:一般是要去除羊膜的
  E. E$ c* p: Y8 |9 z3 r6 |1 o4 D问题3:去除三根血管和羊膜后,剩下的都可以用来做原代
6 m6 u/ P3 T4 Z: Q6 d" M问题4:剪刀剪碎比较方便,手术刀貌似不好用。
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藤椅
发表于 2015-11-4 15:33 |只看该作者
1:结构非常准确,就是这个样子
( E  Q  m  b* j9 g2:去除比较好,不然细胞会有一些显上皮状
2 i! r4 I) o( `, P" {" H8 U3:可以不去除
! f+ F. V. S; B5 t4:一般都是用剪刀,区别的话,这个还真没做过
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板凳
发表于 2015-11-5 10:34 |只看该作者
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同意楼上几位的回答
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报纸
发表于 2015-11-5 10:38 |只看该作者
1、结构没有问题- p* |- L( }5 T
2、一般需要将华通式胶单独分离下来,以确保细胞纯度,因为羊膜上皮细胞生长条件与间充质相似,已造成混杂
! T, E& t1 [2 i. s4 e- O( ?3、去除血管的同时尽量将残留的血管壁等杂志从华通式胶上分离下来
+ C$ s4 H. L1 A5 N4、刀切的组织块相对较大,降低了细胞爬出的效率,剪刀更细碎一些
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地板
发表于 2015-11-5 14:19 |只看该作者
1.结构正确;  P: t$ p+ I* X3 d' [; ~3 d6 t
2.做原代一般建议剥离羊膜;
5 K. W9 G1 _# P1 \4 S3.我们做的时候一般是将脐带剖开,去除三根血管然后直接用镊子从羊膜上往下撕华通式胶;
9 @6 b/ L/ L7 B( q6 Q& U4.通常使用剪刀剪碎后铺瓶培养,用刀切似乎不太方便也没有剪刀剪得碎。
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发表于 2015-11-5 17:11 |只看该作者
回复 haibara007007 的帖子
( k/ p; ^* M: i/ \' V7 E9 S4 Z8 ?* S7 K  _8 u' w
我刚做时间不长,羊膜和华通氏胶有些分不太清楚,请问羊膜厚度大概有多少?

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发表于 2015-11-12 16:38 |只看该作者
回复 jifengtang 的帖子
8 s3 g8 i+ r! M# Y4 r" t% O9 ^5 G( a
( B* @; l: o. Y6 ^羊膜非常薄,百十微米左右,最外面一小层
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发表于 2015-11-27 14:20 |只看该作者
1、结构式正确的;
3 {% z# h* @; l, L' q# O; P2、在组织块贴壁培养时,一般是需要剥离羊膜的,这样可以保证细胞的纯度,同时也有利于细胞爬出;4 {+ [6 m5 t, t7 B6 o
3、最好是能够去除,当然不去除也不会有太大影响,可以进行原代培养;
# a: }! y3 @3 F7 M8 z# V4 X' x4、用刀切的话,操作不如剪刀方便,而且刀切组织块比较大,没有剪刀剪得碎。
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发表于 2015-11-27 14:29 |只看该作者
为保证细胞的纯度,还是要剥离;
6 B6 e5 h. [5 `% z& }不剥离,杂质太多,影响细胞的生长
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