贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：6 W. h" |( f3 L8 Y, L
一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。
0 f# r$ ^" ?9 y/ ]9 ^) s8 D9 k% U二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。
; u4 D0 p& z: `
: v( O$ b+ C" G2 @1 T- F问题1：
3 |# l& @, m' f5 A网上看到的脐带结构的说法是否准确？
" t/ j! d! X0 u% r+ n; X# W问题2：; O2 S+ n+ X' Y* K' i/ w3 n) Q
处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？* L7 f# H9 K* `" g
问题3：0 M# I5 U" C; P; D* O6 n1 R" @
里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？
5 A. G' H; H; [1 N1 @; y4 A问题4：
7 ]; Y  A1 j$ Y# m, t5 W3 Z一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？
0 Y- X/ u' k6 I, z$ l0 w6 e

wuhuaguo88l

问题1：网上图片还是比较准确的
) m, N  q) N6 @$ L5 e7 g+ }9 z问题2：一般是要去除羊膜的
  E. E$ c* p: Y8 |9 z3 r6 |1 o4 D问题3：去除三根血管和羊膜后，剩下的都可以用来做原代
6 m6 u/ P3 T4 Z: Q6 d" M问题4：剪刀剪碎比较方便，手术刀貌似不好用。

haibara007007

1：结构非常准确，就是这个样子
( E  Q  m  b* j9 g2:去除比较好，不然细胞会有一些显上皮状
2 i! r4 I) o( `, P" {" H8 U3：可以不去除
! f+ F. V. S; B5 t4：一般都是用剪刀，区别的话，这个还真没做过

chuanbaozang

同意楼上几位的回答

fuyinsheng

1、结构没有问题- p* |- L( }5 T
2、一般需要将华通式胶单独分离下来，以确保细胞纯度，因为羊膜上皮细胞生长条件与间充质相似，已造成混杂
! T, E& t1 [2 i. s4 e- O( ?3、去除血管的同时尽量将残留的血管壁等杂志从华通式胶上分离下来
+ C$ s4 H. L1 A5 N4、刀切的组织块相对较大，降低了细胞爬出的效率，剪刀更细碎一些

月_幻影

1.结构正确；  P: t$ p+ I* X3 d' [; ~3 d6 t
2.做原代一般建议剥离羊膜；
5 K. W9 G1 _# P1 \4 S3.我们做的时候一般是将脐带剖开，去除三根血管然后直接用镊子从羊膜上往下撕华通式胶；
9 @6 b/ L/ L7 B( q6 Q& U4.通常使用剪刀剪碎后铺瓶培养，用刀切似乎不太方便也没有剪刀剪得碎。

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子
( k/ p; ^* M: i/ \' V7 E9 S4 Z8 ?* S7 K  _8 u' w
我刚做时间不长，羊膜和华通氏胶有些分不太清楚，请问羊膜厚度大概有多少？

fuyinsheng

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8 s3 g8 i+ r! M# Y4 r" t% O9 ^5 G( a
( B* @; l: o. Y6 ^羊膜非常薄，百十微米左右，最外面一小层

小豆芽

1、结构式正确的；
3 {% z# h* @; l, L' q# O; P2、在组织块贴壁培养时，一般是需要剥离羊膜的，这样可以保证细胞的纯度，同时也有利于细胞爬出；4 {+ [6 m5 t, t7 B6 o
3、最好是能够去除，当然不去除也不会有太大影响，可以进行原代培养；
# a: }! y3 @3 F7 M8 z# V4 X' x4、用刀切的话，操作不如剪刀方便，而且刀切组织块比较大，没有剪刀剪得碎。

redmaple

为保证细胞的纯度，还是要剥离；
6 B6 e5 h. [5 `% z& }不剥离，杂质太多，影响细胞的生长