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目 录
3 u( {0 n/ c4 M1 H转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
/ D, V. s) w6 T9 q0 [# F- s* c" G0 z* k" o1. 简介 . . 1: y; \* l! [+ R& I1 X( {
2. 转染基础知识 . . 2
3 l B2 \. r$ U( e5 T转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 g$ `& X$ Q5 \0 A
什么是转染 2
' n# h& T8 u$ v+ _术语 2+ a2 ^& Z# ?' w- s+ U# f% e( F
应用 3
. K" ~8 e" ^' \: e8 {3 N) b- ^# b转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
" L2 f+ z+ B& U+ w6 S O瞬时转染 4) j) L) X) c# f3 c( B
稳定转染 4' G @/ E' F# l( U3 h
选择转染策略 . 5
# x; n& z q: P4 \ U R基因输送技术 . . 77 H4 n7 Q: h! ^& y
阳离子脂质体介导的输送 93 |( V7 {5 B# c, `6 Z
磷酸钙共沉淀 102 H; ~& [. w7 s, d- s
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11- W* |2 i: M0 Z. m
其他阳离子聚合物输送 . 12
0 U: M8 E3 E8 Q+ m. L3 X# D6 [病毒输送 13 s, A& s$ n& j' q+ p4 F8 \
电穿孔 . 14
+ y U: a* Y% f" \, j$ n u其它物理输送方法 . 15
$ ^6 H% E) d0 ~, n6 I, Q/ d, a阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16/ M; s7 ]# r8 d: K; O( ]3 P" M
机理 161 C @+ a) d* t' J
阳离子脂质体转染试剂 . 17: U& i9 z1 n" P8 E. a7 W. w* i
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19, b' l( Q4 U5 o s7 M# m+ q
病毒载体的主要特点 . 197 m8 W/ e7 j. p) Y- `. t
常用病毒载体 19
8 J0 A/ f: L3 x5 A6 b& YNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
/ Q3 s" `4 \3 f稳定转染子的选择 . . 23
9 c+ H9 v5 \) S" x& y用于真核细胞的选择性抗生素 . 23: }! { n1 h: Z" _1 ~! `
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24. m! `5 {& R* p8 R2 H
转染分析 24
_8 U7 y; v/ O; N4 I3 K基因调控分析 25
3 U* Y+ e- U% ?+ d3 _0 A' M. z常用的报告基因 259 o5 G: ]5 G" R0 f
RNAi和非编码RNA研究 . . 26; g- b; p L1 \) b" r
常用RNAi术语表 . 26$ W: E! G4 h( U% s: Y
RNAi工作原理 . 27
1 d0 c1 o7 P, D! CsiRNA分析 . 276 N ~3 [' u- ^
miRNA分析 28( N) E. p5 t }: l' T) n( M
选择RNAi方法 . 29
3 D* \# v: T) A4 r! }6 t6 k0 B3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30 g5 O2 m/ j1 f5 p
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 305 r9 q0 S( g5 H+ Q
细胞类型 304 p+ { M. T9 V* t2 b: {
细胞健康与活性 31) r# p$ v9 L# T; U
汇合 . 32! i& ]1 U6 `/ G9 {, g
培养基 . 322 N, N; W7 z2 y" i/ ^! Y% c4 e
血清 . 32& q. d: G3 i4 _# s$ H6 ^: Z) h& \* Z
抗生素 330 u U9 T* I. @' o* d% b! T
转染分子的类型 339 N9 c! s) D# J4 J+ p
转染方法 33
, Q( e9 x1 C. w& F! x选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34: g, i4 H& y* ]6 ~% ^9 K) N
连续细胞系 . 34; }' [" p' M) D" P! V5 K
原代细胞和有限培养物 . 35
7 A+ O% e' c' L! K8 T* `) u; w选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
# D S6 F5 S6 Z% U哺乳动物细胞表达系统 . 36
, u7 V( Q+ o3 N7 h8 f5 ]; S+ W9 N+ U昆虫细胞表达系统 . 37
* a9 O! f: V$ Y* S* r0 G: v4 v质粒DNA转染指导原则 . . 38) X! c4 Y, ^) `* y, W
载体考虑因素 386 x1 V! P8 m# N( B( x% y* L
质粒DNA的质量 38
8 D/ ~2 n; g" `! @) i; O8 i基因产物和启动子 . 39
) ~2 ^* ?0 ] K" |7 v. J! v" ^8 F对照 39
7 d& B% M8 T9 x" g: t* h) q) k质粒DNA转染的优化 . . 39# y: E' v# v W5 Z6 T7 |+ c0 H& q ?
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40; }: _$ b6 J" }! {+ `: y
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 418 w' q* N' b1 } E
电穿孔的考虑因素 . 43' _+ l( X- q( p: b
稳定转染子的选择 . . 44
1 i% s" I& u7 Q& c开始前 44
1 S9 k- X1 B8 f9 f4 E2 ?+ P0 o杀死曲线 44
% D8 `5 L$ v" V* u4 V9 G+ V& Y选择工作流程 44
. b, Z. G9 y! W6 W2 f选择RNAi策略 . . 46
A/ t" i' v6 ?2 |siRNA与载体方法 46) R, S5 T7 S+ F; { _2 U
非载体siRNA技术 47
* Q% i, a& d+ V2 W o3 @, ]siRNA转染 . 49
5 {9 U) j0 T. {1 i. W. L" y: `# J载体介导的RNAi . 50
$ c, U5 d8 S+ a. e- mRNA转染指导原则 . . 51
$ M. s. S% M" X. i r, eRNAi工作流程 . 51- g. G3 H. j4 B7 T) g! f" D% D4 v
RNA处理 52+ O P5 O" f1 P% T& C! x
转染效率 52* Y/ R! S/ U( S# J
阳性对照 . 522 b& c1 r. k- s1 U4 q9 r
阴性对照 52
) G" ?: M7 `* S0 P e T共转染 53; C8 u" D5 K6 C2 D5 @) j
siRNA质量 . 53& [. m- `5 [6 C& U) {
siRNA用量 . 54& y% ~% Q/ @0 ^
转染试剂的体积 54+ w! T) b- ]. S
细胞密度 54
- V" k* @3 _/ ~" Z h8 X# _* X暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 543 b# I/ R! }( p& F
转染过程中存在血清 . 55
+ u0 I B7 g+ S, W( m0 r5 m) vsiRNA实验成功的技巧 55
( ?& f& w, m* L4 F/ A1 T5 AsiRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
( |, P9 T! N1 x0 k, \: n3 B9 b a影响siRNA效率的因素 56* H1 D+ B- n" A
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57 a; F! a Y! C
转染产品列表 . . 57' J8 G! E' W* C; h: R
转染试剂 57
: g1 L6 L9 g0 G* j) V* }Neon®转染系统 . 58. r# O& V5 |4 p" n% B: Y
RNA干扰 58& x6 v5 S$ x" t* M$ S
参考文献 . . . 59+ o0 [/ l8 N) A
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发表于 2015-7-9 09:28
