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目 录5 b9 F; @* C) @6 n
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii$ B3 {" ]$ a# o5 ?# T1 m: }& {
1. 简介 . . 1/ ^' n! |" C( G5 S+ S/ W
2. 转染基础知识 . . 2
4 f, e4 u( a0 C+ g: {; K6 i转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
, F. L" A' g( q/ k3 Z什么是转染 24 n* k! ^9 [+ F) T) j) [; |
术语 2
* `2 D& D2 X3 \应用 3# u8 Q) o5 U( {
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
' Y8 S' f: k u) ^$ |3 G8 L7 i7 K5 K瞬时转染 4$ E2 M" Y# e0 A- h; Q
稳定转染 4
' o! {% R- Y9 N3 A3 a: B" w选择转染策略 . 5
4 T9 I ]& `1 i) D( G基因输送技术 . . 7. Q. ?$ g) c! u1 v6 v7 L
阳离子脂质体介导的输送 9
: v1 b) E7 n$ f0 r& ^$ G1 i. e磷酸钙共沉淀 102 g" B# y3 U( D$ O1 R+ E
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
" m( c* ^: K3 m! ^- k; b. x其他阳离子聚合物输送 . 12
] r3 T0 e, v" k- D- z病毒输送 13
7 ?) L- k0 [" M7 ]3 d. h [: z. r T电穿孔 . 14
% W6 @: ?+ S# m) L& @7 t其它物理输送方法 . 15) p6 \9 E" h7 s
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
8 d$ J o- A C1 Y7 ^机理 16( Q9 o7 O- h$ ]+ s1 {; ^
阳离子脂质体转染试剂 . 17
/ T# J x, S# D# {: A% z' j" t1 H9 h4 Y病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19# I! ^0 p9 j" {! _8 I
病毒载体的主要特点 . 19 |3 A; i3 \( m
常用病毒载体 19
8 e4 r3 T6 v0 H: L: ?) Q8 O- M1 q2 FNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
6 o# X- A$ [* b& W1 W稳定转染子的选择 . . 23
0 u" B2 [+ i4 Y; C& [+ z% z用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
) v4 l- U. k; l报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
9 W! T( k6 @& g5 m: I转染分析 24/ A: Z$ u( J) t, _0 i, B5 C
基因调控分析 25$ G# \5 A G, Q! q3 B* F2 d
常用的报告基因 25
. F* c: M4 _( m4 P& b1 l7 u. FRNAi和非编码RNA研究 . . 26$ o9 I/ ?2 w$ _
常用RNAi术语表 . 26
- D: a- I* N; E4 y; l. z9 vRNAi工作原理 . 27
{ ?- F: Q' q- r$ t1 DsiRNA分析 . 27+ b: }; u0 j+ D$ E
miRNA分析 28: v) i' {( i' V
选择RNAi方法 . 29
v' G9 V9 t% v( r/ K# M, Z6 L+ f3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 303 q% W2 J8 a) j7 M% N
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 301 F& _& h. U0 o# v0 T, r
细胞类型 30/ p% `" k1 H" P" k/ `
细胞健康与活性 311 f5 U9 M& U! X o4 z+ }; S8 B, i4 @
汇合 . 32
. h% n' s# r" q* S, ?( u培养基 . 32
& R2 ? f5 D/ L, @血清 . 32/ F$ y- z8 A. O' n; J8 X
抗生素 33
3 f/ z* h6 f& c# t! F转染分子的类型 33
% t& \1 T7 c! k转染方法 33
- _ k$ Y5 T% B6 Z选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
/ ]- S5 |" }- S4 {/ O连续细胞系 . 34" i, c" m6 V' s5 N
原代细胞和有限培养物 . 35
" J! Q3 p: k# D( M选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36" x9 b& c7 z! O% k7 a/ a
哺乳动物细胞表达系统 . 36
# A2 Y' m5 P" ^$ X9 K" C& W昆虫细胞表达系统 . 37, r% Q, Y4 d" P/ a# `5 j2 f) A! V
质粒DNA转染指导原则 . . 38
( e$ U0 N% i& f+ x. u8 S载体考虑因素 38. s( s: |5 H, p% ^3 C% l
质粒DNA的质量 380 Y# R) ]. y) a5 K# K G4 C
基因产物和启动子 . 39; T3 A/ b) n8 T' P+ n
对照 39
& `0 C4 r. {) O质粒DNA转染的优化 . . 39/ i- I/ K* \6 O3 Y: I2 z% T w
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
& M' |" o7 D& G阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41' O: G) i0 n$ }+ q4 f
电穿孔的考虑因素 . 43; A+ |% l' L1 ]% `( a! A
稳定转染子的选择 . . 44+ A! b# J) K' M
开始前 446 r; D$ r4 D1 ~$ T' P- J
杀死曲线 449 F) Y; h, e. z3 L. ^
选择工作流程 44, e( e9 v+ Q% l3 D$ \% A" R) W
选择RNAi策略 . . 46, e, b9 w/ e6 ]
siRNA与载体方法 46
2 H4 S7 K$ W, ?1 g# W/ Q+ F- w非载体siRNA技术 47
* \- K1 n/ T% csiRNA转染 . 49
2 C/ m( m9 @& z' f; }8 z载体介导的RNAi . 50
7 i: \5 c$ J# B2 l9 rRNA转染指导原则 . . 51# H! Q* n- ]5 b! A4 o
RNAi工作流程 . 51' S: b" M# Z2 S7 [6 b$ y) E5 X( G
RNA处理 52
1 W4 M6 A0 P) T& A1 a转染效率 52: [) E+ q/ V. p4 P3 B# r
阳性对照 . 521 w/ [8 d$ g. q
阴性对照 52" n+ y' M) k4 N
共转染 53/ J [* U+ {7 }) V# \4 t( i2 K
siRNA质量 . 53 K$ X6 L' `. }: l9 \% i
siRNA用量 . 54# \0 O6 G! t5 W7 p* n0 y# @
转染试剂的体积 54
( ~* Q) [* e- D细胞密度 542 P+ X: v+ ]; h$ V1 v5 w9 b) {
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54" d: s, X& {( U! u( w5 y
转染过程中存在血清 . 55
7 j$ ]3 l& u) CsiRNA实验成功的技巧 55- c$ r* _( Z1 \! K& W/ a
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
7 v4 r$ A. t" W2 ]影响siRNA效率的因素 56) [: b( C% V3 z
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57. o. _. D3 o: {. N6 M7 c+ E
转染产品列表 . . 57
7 R$ I8 ?& d6 L2 ^转染试剂 57) b; J A7 S. v5 p5 ?
Neon®转染系统 . 58" I: z$ L3 n1 h
RNA干扰 58
1 u. ]) h8 B& h/ \参考文献 . . . 59* V5 _: d f% J
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发表于 2015-7-9 09:28
