分离单核细胞时，如何吸取白膜层？

fenlichong

白膜层一般规范操作应该能观察到明显分层。操作时注意：1、待分离液恢复到室温后，将其从离心管底部加入，禁止沿管壁加入；2、将稀释后的血液沿离心管管壁缓慢加入，铺层要缓慢细心，控制血液流速以免流速太大而冲击铺层界面；3、盖好配平离心，全程动作务必小心，防止液面混合；4、离心完后，可见分层。用5ml移液管小心吸取白膜层，可边轻转离心管边吸，尽量吸干净。另：使用分离管分离白膜层效果较好，可试试。

维维睡啦

你用的多少毫升的离心管？先把最上层吸出来弃掉，再吸中层，白膜层以下、红细胞层以上的这一层要保持在0.5公分左右即可，这样可以尽量减少细胞损失，也不容易引入其他杂细胞，效果很好。

cloudycity

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) V; j8 k: P1 i& I: n7 ~9 [0 Y% a5 {
没什么必要···个人觉得，只是追求技术上的完美···哈哈

cloudycity

你具体的操作是怎样的？
( G; t5 B6 h) O3 |血液如何稀释？在ficoll上铺血铺地好不好？血和ficoll的界面有没有被弄乱咯？如果都做好了还不明显。那就是太稀/血不行····5 K, I* v/ d2 v" i- l7 ?3 k; Z

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zz091115

15ml离心管比50ml的效果好 可能是液体张力的原因吧 还有个就是你离心结束一定要慢慢减速 不要迅速从400g降到0 这个非常重要

wanglinling

回复 lxy07 的帖子8 I; W, L$ Q- C0 F& s! V

/ \* f: i$ `; F+ g' _  x- x8 c去血浆是什么意思？怎么去的哦？

lxy07

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0 c# U) L. `: n0 H! g' N, ^) H6 S& v4 }  z# x
全血加入50ml离心管，2000rpm，15min，离心后会分层，然后把最上层的血浆吸掉。

wanglinling

回复 lxy07 的帖子- k* @. s) |& x7 g. Q

# w( c2 m5 U: G' ]你是白膜层一点都看不到还是只是细胞少而已

lxy07

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" Y: [& ~4 v5 Z3 \# W7 O) Y; a& m4 M5 D
离心管平视的话，白膜层和分离液层基本分不清楚，混在一起了，从离心管上面俯视看的话，能看见白色云雾。

wanglinling

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/ l; n6 c1 T/ T9 X0 D. e  b
1 E1 P& k* _9 x* `那还是梯度没有弄好，换一种分离液试试吧，不知道你们用的哪种？