新手求脐带处理得到华通氏胶方法及注意事项

Ivan0108

新手，刚接触干细胞，希望各位大神不惜指点下，万分感谢

20084720113

去动静脉，撕脐带内层，剪碎，贴壁，等待

wuhuaguo88l

手术剪将脐带沿静脉血管平行方向纵向剖开，去除3根血管，小心地将华通胶从脐带中剥离干净。
. M5 P/ }' k, a( H. `- f

3254938

PBS+肝素钠保存脐带；
3 O  z! s2 h; O试验中取出脐带剪去两头，至于75%酒精浸泡30S；; p1 V$ ^9 Q/ j, @# g/ Z
30S后迅速取出，PBS中清洗，剪成3-4cm每段；
& q' z# G! e8 n9 d$ ~% g再清洗一遍，用眼科镊夹住脐带，沿着静脉剪开；  O% g) ~( }" U8 \/ ]6 t! }
摁着脐带一头，眼科镊轻轻剥去静脉层；
8 M  L0 P7 A+ x  x再找出显眼的两根动脉，剥去；
* p/ ~% d! h, `! }' z. {此时可以用眼科镊摁着脐带一侧，另一把眼科镊慢慢剥取华通氏胶，注意不要扯到绒膜；- l* |0 ]7 P) t" W# C) r
华通氏胶剥取后，剪碎，可胶原酶Ⅱ消化，也可直接贴壁培养；

ywx6302706008

用培养基运输脐带，pbs洗干净表面血块，剪刀将脐带剖开，用镊子把脐带组织摊开，先找到静脉，然后用有钩镊（不是有齿镊）轻轻掂起静脉并撕走，再撕掉动脉，注意一定先斯静脉再斯动脉，然后pbs洗3遍，在50ml离心管里剪碎，0.1%的胶原酶和透明质酸酶消化3-4h，过滤，离心2-3次以洗去酶，最后接皿培养

木头1102

用含双抗的PBS清洗，尽量洗干净脐带表面，挤出血管中残留的血液；无菌手术剪剪去脐带两端，余下的剪为2-3厘米长的小段；有齿镊从脐带一端撕开，剔除两条脐动脉及一条脐静脉；用有齿镊将华通氏胶撕下；剪碎后即可用组织块贴壁法或消化法得到脐带间充质干细胞。组织块贴壁法：将组织块铺在培养瓶瓶底，放在37度培养箱内1小时促进贴壁，之后加入培养液放置于37度，5%二氧化碳的培养箱中，前几天不要随意移动，第七天换液，一般十天左右就有细胞爬出。消化法：组织块剪碎后按组织量：酶=1：1加入0.1%胶原酶I，37度消化4-5小时，或者按组织：完全培养液：酶=1:1:1加入培养液及0.1%胶原酶I，37度过夜消化；消化完成后10倍的PBS稀释，过滤后800g10min离心，去上清；PBS重悬后300g5min离心，去上清；完全培养液重悬，加入培养瓶培养，视细胞量换液及传代。一般情况下，消化法较贴壁法培养时间短，但前几代细胞可能比较杂。

小豆芽

1、脐带取回来以后首先用含双抗的PBS或者加双抗的生理盐水清洗脐带表面；) v. [* K* ^* e( ?
2、用剪刀减掉脐带两端1-2厘米左右，弃掉不用；/ U3 Y: [' C7 o# P' m
3、继续用生理盐水清洗脐带，用镊子尽量将脐带里面的血清洗干净；% B* H" |8 V: |9 d0 X; t# _
4、将脐带剪成2CM左右的小段，长短自己决定，操作熟练可以长一点，新手短一点；6 Y5 E; X0 b7 z' [: F5 g" V( [
5、将脐带剖开，去除两根动脉，一根静脉，用镊子撕取华通胶
% J8 q3 J8 f5 p; T$ ~" Y6、将华通胶放入离心管内用剪刀剪碎1mm3左右，转入培养瓶，均匀铺开，贴壁培养。$ M: q" `* P* ?
在整个操作过程中要注意无菌操作，避免染菌

woshibotao_01

脐带先用PBS或生理盐水清洗三遍，置于肾形盘中解剖。用剪刀纵向剪开脐带，用镊子或止血钳剥离脐静脉和两根动脉。小心地把皮内的胶体剥离，然后再用PBS洗一遍。

jddakui

我用胶原酶1消化3小时，怎么看不见细胞呢，求解，都是一些残渣漂浮在培养液里

细胞海洋

回复 jddakui 的帖子3 b, X- V, i1 U, {% O
0 z2 U$ M" |0 C$ p( U
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
0 M: `2 Q4 D# C, j, i# S# l% ^: ^
否则他会看不到