新手求脐带处理得到华通氏胶方法及注意事项

yooung

1.脐带用含100 U/ml 青霉素、100 mg/ml 链霉素的PBS 液反复冲洗，洗掉残留的血液。PS:青霉素主要针对革兰氏阳性菌，链霉素主要针对革兰氏阴性菌。2 m9 r3 }. ]% b0 c+ @. ]
2.以上述描述的方法，剪为2-3厘米长的小段，除脐动静脉，得到华通胶。& A! F; S# q1 M
3.根据自己的需求确定培养方法：是组织块贴壁法，还是酶消化法？组织块贴壁法操作简单，培养出的MSC细胞稳定好，但是原代培养时间长，通常要2、3周时间，不过比较适合新手操作，如果不赶时间，可以选择该法；酶消化法，涉及参数较多，如样品使用量、胶原酶使用量、消化时间等，如果一个参数控制不好，就会影响MSC细胞的活性，不过得到的细胞数量多，培养时间比组织法短的多，适合大量原代细胞的需求。1 O& p- T; r$ m: N' _5 Z
4.培养基的确定：通常用含胎牛血清的DMEM/F12培养，……  }. A7 \4 w: i  w4 A$ }3 C2 w0 a& }
哦，好像离题了，请参照两点吧，后面的不舍得删，请pass掉。

yooung

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. h) u, g" a# h3 S# G如果显微镜下看都不知道细胞的话，就可能是消化太过了，那你再调整一下样品量、胶原酶使用量（浓度）和消化时间这三个参数的比例吧。

jddakui

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酶消化初始密度比较低，P0第6天才看见细胞，可以培养多久 ？时间长会不会分化？

yooung

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5 ^. C/ A. H+ h7 I" A/ `& c4 G(我答案全是来源于文献和对文献的认识，并非实际操作经验所得，请谨慎参考！）
- c0 O+ T8 z* @8 O培养第5~7天才见细胞贴壁，这是很正常的情况啊。
/ r$ T$ Q9 j+ U$ w细胞贴壁后注意及时换液。, K8 M! u, i3 r' c& v0 \% ~7 q# Z
按常规来说，细胞融合到80%就可以消化了，因此，贴壁细胞少，你可以慢慢培养，一直到80%。; S# w- ]* ]: E! W2 h' H! N, t
培养时间长应该不会分化，组织块法的培养时间为二十多天，其中爬出的细胞培养时间这么长，也不见细胞分化啊。不过注意及时几天换液。

jddakui

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$ k# g4 l; a9 U+ B( k, H1 Q/ ?$ b, s  @
我继续观察一段时间吧  谢谢解答

yooung

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8 j; m$ a2 G, |1 A

firstaider

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3 w" o  k# [6 v7 l- f" c  ~6 U2 [6 Z" u# i
. Q" H. p! S6 Q我们实验室是先把脐带剪成5、6CM长左右，然后在一端剪出一个豁口，将脐带纵向剖开，用带齿的镊子将两条脐动脉和一条脐静脉分离出来，动脉容易分离，脐静脉有点难分，技术活，熟练就容易了；将华通胶也就是脐带间充质一条条剥离出来，不要把表皮撕下来，白色的胶即是了。开始操作都很不容易，慢慢的就好了

晗晗

拿回来的脐带先用PBS冲洗几遍把血污都洗干净
% V- V" Y  @4 {; o, o/ l酶消化法4 n& N# g" n% z% X4 U+ B4 e: c
将脐带剪碎，然后转移到离心管中然后加酶消化，然后吸取消化液，加培养液，放到37℃5%CO2孵箱中培养; W& J7 x/ _3 ]6 c; D9 O  X: v/ o
组织块法
  z% _3 I3 ?3 g2 H0 F; U把脐带剪碎，然后用PBS冲洗一遍，然后放到另一个培养皿里，然后加入培养液，不要加太多，防止组织块飘起来，最后放到37℃5%CO2孵箱中培养: j$ B) n5 T* t% l8 e1 l
如果是新手的话建议用组织块法3 w) w4 Q5 Q) d, J1 l% I
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saliai2016

其实操作步骤并没有什么严格的限制，只要把最外面那层、静脉、动脉去掉，其他的留下就可以了，只要对各部分能够清楚的分辨，可以根据自己的操作习惯来调整的。