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求助人脐带间充质干细胞提取方法   [复制链接]

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金话筒 优秀会员 美女研究员

楼主
发表于 2014-2-11 09:49 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
想要提取人脐带间充质干细胞,文献上查了很多,比较看中的是:无菌取健康胎儿脐带4~5cm,PBS加双抗充分洗涤,用注射器冲去脐静脉及动脉内的残留血液,分离并去除脐带外膜组织和血管组织,即可获得脐带Wharton胶组织,将其剪为0.5-1 cm3大小的组织块,以DMEM(10%FBS,双抗)重悬。置于37度,5%CO2培养箱中培养7天,使干细胞贴壁,之后每3天换一次液。对数生长期时以0.25%胰酶-EDTA消化传代。取第3代细胞以流式细胞仪鉴定。以CD73, CD90, CD105阳性而CD34, CD45和HLA-DR阴性的为所需的hUC-MSC。想问一下有经验的同学这个方法合适吗?有什么需要注意的吗?
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沙发
发表于 2014-2-11 11:40 |只看该作者
虽然没亲手做过,还是觉得获取wharton胶比较需要耐心,影响细胞纯度
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藤椅
发表于 2014-2-12 11:16 |只看该作者
剔除2动脉1静脉(必须剔除干净),再剥离动静脉旁的组织然剪碎后直接培养,效果不错的。注意第一次换液把液体和组织块一同离心,再尽量除去上清液,加入培养基再从新接种回原瓶。
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金话筒 优秀会员 美女研究员

板凳
发表于 2014-2-12 12:44 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
回复 tiduswang 的帖子
( p" z& f0 ^# h4 {; l! P# x: o( v+ {* l) u: R) k. a! e8 h" T
那如果从动静脉旁的组织中能提取到间充质干细胞吗?不是从胶中提取
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金话筒 帅哥研究员 小小研究员 优秀会员

报纸
发表于 2014-2-12 13:40 |只看该作者
wharton胶不是那么容易分离的,脐带的两根动脉很好剔除,静脉血管壁很薄,常常和wharton胶连在一起不好分离;另外wharton胶与表皮也是不好分离的。wharton胶很有纤维弹性,在分的时候要首先把wharton胶剥成细一些的长条,然后再用剪刀剪碎,不然你会发现组织块剪得有大有小;还有就是把握好剪的时间,不要过长以免对细胞造成严重的机械损伤,当然时间太短就会剪不碎组织块。间充质干细胞时从组织块周围爬出来的,所以尽量保证组织块贴壁,所以原代培养7天不要晃动培养瓶。
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地板
发表于 2014-2-12 14:00 |只看该作者
多洗几次
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发表于 2014-2-12 16:36 |只看该作者
之前看过新加坡脐带血干细胞库的操作过,就是这个方法,要注意的就是细致,再细致,反复冲洗~
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发表于 2014-2-12 17:08 |只看该作者
回复 liruokun 的帖子
1 B# ^. _0 C7 r2 ~% l8 U8 h: W5 |$ T, ^$ \
你说的方法是我写的那种吗?

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金话筒 优秀会员 美女研究员

9
发表于 2014-2-12 17:09 |只看该作者
回复 孙帅帅 的帖子
3 ^' C( h) z4 m; Y0 G
( c5 l7 d. ~) @; \& w9 B1 W- y/ q9 _啊,好多需要注意的地方,多谢!!!

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帅哥研究员

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发表于 2014-2-13 15:30 |只看该作者
回复 听不到 的帖子( D8 z& h6 D: L; W4 D$ |

* W5 A4 z" X% X8 q, x3 o可以的,如果你够耐心的话,你可以把剔除下来的动脉管旁的wharton胶分离,但必须细腻操作,不要参杂到血管,主要就是细心就可以了,做多了就好了,不难。
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