求助人脐带间充质干细胞提取方法

听不到

想要提取人脐带间充质干细胞，文献上查了很多，比较看中的是：无菌取健康胎儿脐带4~5cm，PBS加双抗充分洗涤，用注射器冲去脐静脉及动脉内的残留血液，分离并去除脐带外膜组织和血管组织，即可获得脐带Wharton胶组织，将其剪为0.5-1 cm3大小的组织块，以DMEM（10%FBS，双抗）重悬。置于37度，5%CO2培养箱中培养7天，使干细胞贴壁，之后每3天换一次液。对数生长期时以0.25%胰酶-EDTA消化传代。取第3代细胞以流式细胞仪鉴定。以CD73, CD90, CD105阳性而CD34, CD45和HLA-DR阴性的为所需的hUC-MSC。想问一下有经验的同学这个方法合适吗？有什么需要注意的吗？

Soso

虽然没亲手做过，还是觉得获取wharton胶比较需要耐心，影响细胞纯度

tiduswang

剔除2动脉1静脉（必须剔除干净），再剥离动静脉旁的组织然剪碎后直接培养，效果不错的。注意第一次换液把液体和组织块一同离心，再尽量除去上清液，加入培养基再从新接种回原瓶。

听不到

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那如果从动静脉旁的组织中能提取到间充质干细胞吗？不是从胶中提取

孙帅帅

wharton胶不是那么容易分离的，脐带的两根动脉很好剔除，静脉血管壁很薄，常常和wharton胶连在一起不好分离；另外wharton胶与表皮也是不好分离的。wharton胶很有纤维弹性，在分的时候要首先把wharton胶剥成细一些的长条，然后再用剪刀剪碎，不然你会发现组织块剪得有大有小；还有就是把握好剪的时间，不要过长以免对细胞造成严重的机械损伤，当然时间太短就会剪不碎组织块。间充质干细胞时从组织块周围爬出来的，所以尽量保证组织块贴壁，所以原代培养7天不要晃动培养瓶。

yakunsong

多洗几次

liruokun

之前看过新加坡脐带血干细胞库的操作过，就是这个方法，要注意的就是细致，再细致，反复冲洗~

听不到

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你说的方法是我写的那种吗？

听不到

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3 ^' C( h) z4 m; Y0 G
( c5 l7 d. ~) @; \& w9 B1 W- y/ q9 _啊，好多需要注意的地方，多谢！！！

tiduswang

回复 听不到 的帖子( D8 z& h6 D: L; W4 D$ |

* W5 A4 z" X% X8 q, x3 o可以的，如果你够耐心的话，你可以把剔除下来的动脉管旁的wharton胶分离，但必须细腻操作，不要参杂到血管，主要就是细心就可以了，做多了就好了，不难。