求明胶包被培养瓶的流程步骤

pydsn88

如题  课题组没人做过 ~~包括明胶该怎么灭菌 我觉得这个好麻烦啊 主要是不好过滤

星光灿烂

这个我觉得自己做的话会很麻烦，而且每批的质量不能保证，鼠尾胶原和明胶都有成品买，也不是很贵呀

shihuijunm

回复 星光灿烂 的帖子
7 j( j* U* o" s( V, G: c) ]5 J0 K+ B" _7 ^
我们实验室用的是这个，你可以买' ?' V. H! d$ G6 M' S/ X
gelatin form bovine skin (Type B powder bioReagent) % R9 T% H8 _4 V. L0 @# {/ _$ |
suitable for cell culture
! c$ _/ T/ ?# P0 T8 x( K% `$ Asigma G9391-500G
8 F, N5 O* m, GCAS 9000-70-8* z6 n, p* K+ p- r9 @
用的时候用去离子水配成0.1%浓度，高压灭菌后就可以直接用了，用的时候放在37度培养箱跟培养皿作用30min，或者包被过夜都可以。

xiaolizhang87

回复 pydsn88 的帖子7 L; a7 i7 W9 ~% y
, H% R: e% m; ~, h; o, ^& H; h
我们的做法是：sigma明胶粉末用DPBS溶解，于121℃，灭菌30min后，于-20度长期保存。包被之前提前一天4度过夜融化，用之前平衡至室温，随后用于包被（37度，1h；或4度过夜）。最好现用现包，不要包被好之后放置时间过长，会影响效果。

embryonic12

请问包被过程的具体操作，把胶放进培养皿就行了么？

星光灿烂

我觉得你是对包被这个概念不太了解，其实很简单，就是把你已经处理（灭菌、稀释等等）好的明胶溶液加到你要包的培养皿中，以能够覆盖培养皿底部为准，哦，要稍稍多一点，不要为了节省就加的量比较少，否则放置一会还会出现覆盖不满的状况。加好之后放于37度，1小时或者4度过夜都可以，这样明胶会均匀贴到培养皿的底部，用之前用基础的培养基洗一遍或两遍就可以了。

pydsn88

回复 shihuijunm 的帖子3 P- A. i7 B- ?& F6 s( O" h

: z9 x/ z  O; m4 t9 Y8 T1 p9 d3 T非常感谢 我买的跟你们一样的 还想问一下，高压灭菌完了 你们还用0.22um的滤膜过滤么

pydsn88

回复 星光灿烂 的帖子2 Q* p/ y2 |/ p* _$ ~8 L: D. @
- K( G- _0 c/ \5 W% S' u
非常感谢 这些经验真的很重要

pydsn88

回复 embryonic12 的帖子  X# m. m& C/ u' W; J8 j/ ~( i+ z

$ Z- U" C6 z" {. d1 s- Z应该是把胶放进培养瓶 孵育过夜之后 再冲洗掉 要的是站在瓶子壁上的

pydsn88

回复 星光灿烂 的帖子* K6 i/ J: ^2 A  @2 L
$ v+ D2 Z) [2 ^
您是说 无菌液体包装的那种么  我就觉得好遗憾 我定试剂那会赶着圣诞节只有国外有货说得等个半个月才到 一心急 买的sigma的无菌粉剂 还要自己配 无菌操作最犯难了