求助关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

我做的人骨髓间充质干细胞用的一下方法，但还有些细节不是很确定，请有经验的大侠给与指点:
. G5 B- b% }3 Z+ w) z1 骨髓原液加等量PBS混匀、离心600g/10min，洗涤去上清
+ g- M* k2 r1 H: B- X2 加等量PBS混匀，缓慢冲入FICOLL中，比例为骨髓稀释液：FI=2:1，900g/30min，离心，吸取白膜层
: j! o* o* M3 U3 加少量DMEM混匀，600g/10min去上清，将细胞悬于DMEM中，接种皿，放培养箱培养。
1 `4 X# b, \- H: N! f/ I/ w4 三天后，全量换液。0 n0 R3 {0 b" D. z$ r

( {+ g( M. h; Q# V  C三天换液时，因怕反复冲洗冲掉MSC，我只是将PBS倒入培养皿中，然后晃了晃培养皿然后就将PBS吸走了，只洗涤了一次就换液了，此时这步骤是否正确，是否需要充分洗涤三次再进行换液？3 W; f+ c9 R4 y1 [5 m
还有以上的细节那部分会有不妥，也请各位大侠给与指点。非常感谢！

camus

MARK一下，学习学习

dimi_luki

学习一下，最近开始做人的间充质干细胞了。。

wcforever126

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# t  n) S3 p6 K) z" C7 r
) D8 l; q) ?9 M; P3 p您好，您用的FICOLL是多少密度？8 v- k9 p' J6 Y/ |$ L7 ]3 ^( \

wcforever126

回复 dimi_luki 的帖子
5 G: d( j9 I* F( T0 S/ ?# V- w- H, d* a5 a# q& ]
您好，想请教您些问题，小弟最近开始做人骨髓间充质干细胞这方面的，从提取这步开始做的就不是很顺利，麻烦您看下我的步骤有没有问题，谢谢。  H& }* B  Z/ }5 t* D
麻烦看下小弟提取步骤有没有问题：骨髓：生理盐水=1:1，Ficoll-Paque PREMIUM（密度1.077）：稀释后骨髓标本=1:1，离心2000转，15分，20度，最大加减速4/3，中间白膜用生理盐水稀释至10ml，1500转，4度，8分钟，最大加减速4/4，重复2次，加培养基。, P7 k% t; S. m, t  b' a
可不可以把您的步骤及注意事项发给我，我邮箱823293603@qq.com，谢谢。

liuyul03

很多人在用全骨髓贴壁法，效果也很好啊。
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liuyul03

很多人在用全骨髓贴壁法，效果也很好啊。; O- W  v; c3 J. c1 ?8 m+ U: K' m; R$ v