BMSC的消化问题

天山飞鹤

用0.25%胰酶+0.02%EDTA消化5min，贴壁的细胞很难消化下来，而且对细胞伤害很大。改用0.125%胰酶+0.01%EDTA,放培养箱中10min，约70%左右的细胞能下来，细胞形态也还可以，请问还没有更好的消化条件或消化方法？

zly微笑

你的胰酶是不是刚从冰箱里拿出来就用了啊？最好在37度培养箱里面先预热15到20分钟，因为胰酶在37度时消化作用最强，一般2分钟就可以了

zly微笑

你的胰酶是不是刚从冰箱里拿出来就用了啊？最好在37度培养箱里面先预热15到20分钟，因为胰酶在37度时消化作用最强，一般2分钟就可以了

yinjiqingqq

可以试一下accutase，对细胞损伤小，但是有点小贵啊

郝晓英

用第一种胰酶即可  肯定要预热至37度  一般消化时间在1分钟左右  如果不纯的话借机可以提纯   没有消化下来的证明就不是MSC  是人的还是动物的？

天山飞鹤

回复 zly微笑 的帖子/ s4 I% @0 n  U8 x4 W
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我的胰酶是拿出来放超净台大概十几分钟后再用的，可能温度低会有影响。不过先在培养箱里预热约15-20分钟会不会使用剩下的胰酶作用减弱？难道还要每次分装胰酶，然后再预热？

天山飞鹤

) T. C) _8 |  z, K$ d  t
4 |8 r9 s! _3 E- `( W回复 郝晓英 的帖子
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' [  l  M; t- c; ~是大鼠的骨髓间充质，理论上应该是很好消化的。你们是每次用之前分装所需用量的胰酶，培养箱中预热后再消化？消化时需不需再放培养箱中？

郝晓英

回复 天山飞鹤 的帖子# T+ g6 _6 ]0 _, W  |* U! A
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没有分装  直接吧装胰酶的瓶子放在水浴锅里预热   消化时也不需要放在培养箱里  理论上   实际上都好消化    如果如你所述那样难消化   估计就不是MSC   

天山飞鹤

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1 J! P* J) @( L* ]. I6 i反复预热会不会使胰酶降低功效？

郝晓英

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' N' H1 f0 l) M没关系的  你如果愿意分装当然也是可以的