BMSC的消化问题

yanwu_1

其实不预热也是可以的吧，直接放37摄氏度笑话，控制好时间也是可以的，间充质还是很好消化的

zly微笑

一般胰酶到了之后，我们会先分装到15毫升离心管里面，分别冻存起来，需要几支拿几支。如果整个一瓶的话，经常预热肯定会有影响的

zhanglei1414

MSC贴壁很不牢的，我用0.05%的胰酶就能消化下来，消化不下来肯定不对，建议你降低胰酶浓度，下不来的细胞就别要了，那不是

如来的观音

回复 郝晓英 的帖子
2 z1 ]6 q. o. M) p2 z8 k& t- X' r' U% Z2 F/ i! M
那你的意思是一分钟后还没有消化下来的就不用吹打了吗？（即使吹打下来的也不是MSC吗）

Demon_CN

培养细胞是个细心的过程，以前我也和楼主一样，试剂都是从冰箱拿出来就用，没有提前预热。酶有最适温度，达到那个温度消化能力最强。我记得我经理以前问过我一个问题：把你从室温，一下丢到4度的水里你会怎么样。答案很明显你很可能会感冒。所以从哪时候开始我进实验室做实验就吧要用的试剂提前预热---除了冻存液！

郝晓英

回复 如来的观音 的帖子3 Q' ^1 b+ a! H* v- b% r* F
1 C2 a6 b- N4 `8 {  B, a$ v" l
恩  我个人认为是这样的  至多1分半 剩下细胞里面应该还有MSC 但是不是很纯了  我已经做过流式鉴定了  按此法阳性表达均在98%以上  

ophden

大鼠BMSC原代培养时，第一次传代是有一些圆点一样的细胞不容易消化下来的，这些都是杂细胞，楼上有位说的对，你可以借机纯化一下BMSC，贴壁的丢了吧。胰酶没有温到37°也可以的，加到细胞上后放到培养箱里，会变加热边消化的。

Tim

回复 天山飞鹤 的帖子
5 _' T& B6 |! J. G) U0 H
6 U* p, C2 u& Z' B& f# ~你在消化之前用DMEM多洗几次细胞！把残余的FBS都洗干净了！再把DMEM洗出来！然后再加胰酶消化！因为FBS可以终止减弱胰酶的消化能力！
% ~. x* Y. P. o6 e5 ?! \ 胰酶用的时候从4度取出来放到室温过一会再放到37的水浴锅里！

心蕾

回复 Demon_CN 的帖子' X' Q6 `2 C7 @; Q" p2 Y
2 Q7 |2 k9 o# p3 V: K# D
做实验前肯定要把实验要用的东西提前预热的，冻存液也不能除外，冻存液虽然是常温放置，但是冬天的时候有时也会凝结，这个冬天我们的冻存液就凝结了好几次。