求教ES转染小RNA

歪歪

有人做过ES的RNAi实验吗，是否需要用无feeder的ES培养，用哪个试剂，怎么转的？

echowdk

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/ ~/ K. @0 {- h: S, A( }' P: U: F1 _2 h+ |9 ~! F8 E
你的小RNA是siRNA还是shRNA。0 I" \: P* Y/ J$ D0 u+ d7 Q
我就做过shRNA的转染，而且shRNA的载体是普通的载体，不是病毒的。
6 r' X. X; ?! \. ^" _我就用lipofectamine2000，跟普通的ES细胞转染一样。
5 r7 E: L, p# E! t& x* c  M5 k铺不铺feeder都可以，看自己实验习惯，只要对照组和实验组一致就好了。- I) V8 \1 j% p$ A% B2 b7 a) a
要是siRNA转染的话，自己找paper看一下吧，应该有很多的。
3 {, P7 T) C9 x" m% t

sciencezhu

请教下echowdk,最近mES养的状态很不好，是在Feeder上养的，能否给点提点啊？还有，如果转染或者感染ES，用什么载体效率会比较高啊？谢谢了8 Y' i3 ]) h4 H4 D3 D1 M

fananran2003

回复 echowdk 的帖子5 j5 E' X: U6 p: g7 ]
* u, t. Z) O+ R( g
请问一下你们ES的转染效率能达到多少啊?

echowdk

回复 fananran2003 的帖子0 M( M2 D3 Z6 C& D: T$ b

5 {9 M& q3 q9 [- F. t9 J1 e5 K用lipofectamine2000转染普通的质粒的话，效率很高，没有具体统计过，大概有90%+的样子。

秋槟茗

echowdk 发表于 2011-12-19 12:50
- l  a3 T6 D% }% i4 k回复 fananran2003 的帖子7 }" G% W5 h2 L- B/ ?7 l

2 c: s# {" W' Z用lipofectamine2000转染普通的质粒的话，效率很高，没有具体统计过，大概有90% ...

- P. P6 w! _2 `: k' K5 e请教老师，能否分享下具体步骤怎么做，谢谢，，

秋槟茗

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% y, a% j( L" J) U) W9 G2 H- h
7 d/ l3 T  y1 N请教老师，能否分享下具体步骤怎么做，谢谢，，

张月儿

搜Efficient gene silencing and cell differentiation using siRNA in mouse and monkey ES cells这篇文章，写的挺详细的。

gscao

回复 echowdk 的帖子! ^; H7 ?* H7 Y( ]9 A: n' ]

( O8 Z  H# B" f$ _* A我们小鼠ES细胞转染效率远没有那么高，即使用核转染仪，转染效率也才达20%，我们用流式细胞仪分析的，这说明你在这方面是真正高手。你能否提供几点建议来提高ES细胞转染效率。谢谢！