求教ES转染小RNA

歪歪

有人做过ES的RNAi实验吗，是否需要用无feeder的ES培养，用哪个试剂，怎么转的？

echowdk

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3 B2 {5 u8 `$ y5 M你的小RNA是siRNA还是shRNA。5 L" H. m* F" P
我就做过shRNA的转染，而且shRNA的载体是普通的载体，不是病毒的。2 P6 o5 g* h3 @( D5 C
我就用lipofectamine2000，跟普通的ES细胞转染一样。
0 I: ]9 d4 @) S& U铺不铺feeder都可以，看自己实验习惯，只要对照组和实验组一致就好了。
4 }8 d( W5 u/ ^: T: J8 Z  W4 C* k要是siRNA转染的话，自己找paper看一下吧，应该有很多的。4 T6 V4 R9 P9 c0 ]& r+ r3 A- h

sciencezhu

请教下echowdk,最近mES养的状态很不好，是在Feeder上养的，能否给点提点啊？还有，如果转染或者感染ES，用什么载体效率会比较高啊？谢谢了: d, f% l. C6 ~2 k" w* _$ V

fananran2003

回复 echowdk 的帖子% S6 r4 i0 ~* Z: }& Z& b& b. H
3 h) @7 T2 U! r- r) I7 h9 j
请问一下你们ES的转染效率能达到多少啊?

echowdk

回复 fananran2003 的帖子" J. `' V7 [% ~. E( X" }
, }9 x9 B  J! q: J# q% Y0 k; z
用lipofectamine2000转染普通的质粒的话，效率很高，没有具体统计过，大概有90%+的样子。

秋槟茗

echowdk 发表于 2011-12-19 12:50 ) C2 P! g- \; U( X- g
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- N0 ?4 A7 a/ G) l! u/ ?* Z用lipofectamine2000转染普通的质粒的话，效率很高，没有具体统计过，大概有90% ...

; k% W, f5 |& |! g0 e请教老师，能否分享下具体步骤怎么做，谢谢，，

秋槟茗

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" I8 c% y# |; a( ]
请教老师，能否分享下具体步骤怎么做，谢谢，，

张月儿

搜Efficient gene silencing and cell differentiation using siRNA in mouse and monkey ES cells这篇文章，写的挺详细的。

gscao

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1 ~+ V& j& s) W  E8 B4 I8 @我们小鼠ES细胞转染效率远没有那么高，即使用核转染仪，转染效率也才达20%，我们用流式细胞仪分析的，这说明你在这方面是真正高手。你能否提供几点建议来提高ES细胞转染效率。谢谢！