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回复 pla269 的帖子# y& ]( I+ |. l, K& k2 n
' S4 w6 [6 A9 q2 t0 a1 k我们正常的流程是:& o' u' C9 y a' ~9 O- N
第一天,下班之前也就是5点钟接菌,37度震荡培养;
. u6 m1 u( `7 W# X第二天,上班的时候(9点钟)收菌,培养的时间也就是16小时左右。
1 C {$ U0 k9 t2 T E! K! a3 ]基本上是目测判断菌量的多少,很久没有测定过菌液的OD值,我忘了是0.6-0.8还是多少,你可以自己查一查分子克隆手册。凭着经验,看起来比较浑浊就差不多了,因为我提取质粒一般是用作细胞转染,按照我们以往的实验,都是大致这样的流程,所以没有很细致的去研究这个。/ ^( u- n- v6 B& C1 X. x) } M
摇菌4-5小时的话,在我们这边不大合适,因为这样接下来还得抽提质粒和验证质粒需要花费2-3小时,那样一个工作日就排满了,有可能做不完还得加班。
' O1 Q% B! ^6 s5 U# k% I: E8 D我觉得在基础实验这一块,尤其是商品化试剂盒非常成熟的基本实验技术,第一次第二次认真参考实验手册,这样你就会得到自己的判断,如果只是简单的得到质粒作为后续研究使用,你大可不必拘泥于实验手册,毕竟每种菌、每种质粒有自己的特性,怎么方便实验流程怎么来。 |
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