现在很多设计软件都能给你Tm值，但是由于所用算法不同，Tm值也会相差很大，一般来讲，PCR所用退火温度低于Tm值5度就可以了，值得注意的是，两个引物的Tm值不要相差太大，否则肯定对扩增不利！如果这样设置还无法得到满意的效果，建议你摸索退火温度，其实就是多做几管PCR而已，现在很多的PCR仪都可以设温度梯度，所以其实也很容易。在保证有产物的基础上，如果有杂带，而你的PCR产物对于提高退火温度又非常敏感，你可以尝试touch down PCR或者hot start PCR，需要自己去搜protocol吧！
发表于 2011-7-1 03:15
发表于 2011-7-1 10:09
