关于克隆效率问题

songzxj

各位研究员：
1 O5 l6 a* j  T    本人最近一直在思考一个问题，那就是克隆的效率还能提多高？最终能不能达到体外受精的效率呢？请各位研究员发表您的见解。

songzxj

先抛砖引玉。2 q( b0 C$ h  H( ]. H1 D9 r
我觉得克隆的效率可能不会像IPS诱导那样，随着其研究的推进而不断得到提高。3 f. S" R5 b5 _: E" O9 {# P" r
因为IPS在诱导过程中可以有针对性的、特异的改变培养条件或者更换供体细胞等手段来提高效率。而克隆是卵胞质随机的reprogram体细胞，重编程的是否全面，是否每一次都一致，很难讲。卵子reprogram过程的相关因子研究并不如IPS那样清楚。没有办法做到像IPS那样有针对性的添加相关的因子。自从1997年多利诞生到现在，世界各国克隆专家一致在致力于克隆效率改进，但是效果甚微，因此我觉得克隆的效率不会得到显著的提高。: {3 n- v+ V9 }. F8 A! S- Y
一点拙见，请大家指正。

张也行

回复 songzxj 的帖子8 [6 l3 _( w3 V. L% B3 y1 d0 C

! |! r1 n" Q$ f- u9 q2 Q5 B9 L' n; u首先核移植的效率比正常用四个因子诱导的效率要高一些！并且核移植重编程得到的ES细胞要比iPS细胞更接近ES细胞。2 H  |$ Y% m' P) a7 Z7 D! O4 w
iPS重编程和核移植都可以看成是随机的。iPS重编程因子发现也是源于卵子具有重编程能力，并从中发现了四个因子。
: j5 y! I) O- }确实iPS更好容易manipulation，但是四个因子重编程得到的iPS常常面临着不完全重编程的问题，影响iPS的分化潜能。再说核移植得到的囊胚也不是不能认为干涉的啊，在iPS中有效的一些小分子有一些，比如影响染色体结构的小分子也能促进核移植的效率的。
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douhw

因为是HMC，体系都还不错，囊胚率也高，第四周受体怀孕检测有时达100%，而且转基因有时更好，但问题是怀孕中期有吸收的，也有中后期死亡的，畸形的，还有预产期孕体给受体信号不足而产道不开滞产死亡的，产后哺乳期也有死亡。总之，要解决整个体系问题，如楼上所说，或许可在囊胚阶段加以干涉。

songzxj

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2 U1 Y2 C  o& B  W7 t
0 i7 x+ i5 I$ D* M: K$ T* f谢谢！2 f. t( f! [' i. s& H- C
非常赞同你的一些观点，核移植效率要比IPS的效率要高，且NTES比IPS更接近ES细胞（这是去年一nature paper求证过的）。) M0 o+ ?/ X/ Y( C' {& v: `6 z: J+ e
/ H1 u  H& p) i" R: ]" W
我们知道四因子发现源于卵子的重编程（或者细胞融合过程的重编程，我不确定），但是这些发现却没有应用于克隆效率的改进！你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。4 Z+ r4 S( {0 O5 z5 d% F7 @7 A
0 z0 ~0 c0 T$ m4 ^. Y) T
所以我想IPS中有效的因子对于提高效率可能并不起作用。

songzxj

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& l& C7 e" i9 S/ I8 t* Y$ K" }& @! [* }! m1 i* H$ I$ _
不好意思，我其实是不看好HMC的，可能是偏见吧。不过它在牛的应用上真的很成功。4 N  V  _$ g: |% X3 Z" Y6 @
3 C) m5 B7 E* a: H# n; h0 g+ m. V
请问你做的是什么动物？第四周检测怀孕率，猪吗？* P; g# Q9 e, R8 |- Y0 J, l" a- a
! L/ |' y+ B9 M( s+ a3 g3 \
怀孕中期吸收的现象是很多克隆动物共有的问题了，这个追根溯源应该还是重编程不完全造成的，所以说体外囊胚率高并不一定胚胎质量好，它只是其中一个参数。
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解决重编程问题的途径不外乎那么几个时间点：供体细胞、早期胚胎和囊胚期。但是前两个时期算是预防的话，那囊胚期只能算是补救治疗了，因为那个时候胚胎已经由多潜能细胞期重新进入分化过程。

张也行

回复 songzxj 的帖子! H( M: @5 z4 W2 \+ A
2 u" E- O( I' I; w3 p- O
/ Q  f  p5 W3 w

你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。

. f% `, Z; g' s
我觉得也不是。在成熟的MII期的卵子中是有这些因子。虽然Yamanaka曾在文献中说iPS灵感来自核移植，但是iPS最初是从ES特异性的基因库中筛选出来的，分离出来的是因子都是与多能性相关的关键因子。但是，我觉得我们不应该吧核移植得到的一个完整的胚胎，也就是说核移植获得的是全能型的细胞（totipotent），从发育的囊胚中分离出了ES细胞。而四个因子诱导的iPS细胞是多能性的（pluripotent）。核移植获得的融合胚胎能生长到囊胚阶段，从中分离出来的ES细胞（NT-ES）与正常fertilize，分离出来的ES更接近也就容易接受了。
4 b. p1 Z( ]3 r. ~+ e所以，iPS应该更多的向核移植“学习”，比如周琪和高绍荣都试过分析成熟卵子中的蛋白质以期望获得更多，更关键的重编程因子。

douhw

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& g0 E3 E) X2 S3 k" K4 h5 u8 r3 d! k# q, Q$ i
HMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。- r  l5 `" I" T5 g7 N
" ?+ }1 x8 K0 z
我觉着，重编程最重要的处理阶段是在融合前后，因为在体细胞进入卵胞质、融合后，重编程便开始了。

ambassador

5 o, ]& x/ i  x) y( J

douhw 发表于 2011-1-11 09:55
, c4 v/ I/ y5 T回复 songzxj 的帖子
$ R7 u  C3 D* ]+ |; G# V0 Z( I  c5 S8 q
HMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。

) R' c$ k' F; d' S2 b
* L, Q+ Y: L1 W. C我个人觉得不足之处是需要提供大量的卵母细胞（这个在大型猪场可以提供，也就不是问题了），其他的不足之处，还请多指教？
% [3 C+ B( G8 _6 R3 i3 I# c# O% {' u" W0 ?4 L- E
还有在重编程最重要的处理阶段，融合前是只对受体细胞（去核的卵母细胞）进行处理？融合后的体外成熟除了常规的方法外是如何处理？

douhw

回复 ambassador 的帖子/ C' G4 Z( Q/ X! `4 Z3 U
* Y( f; O8 L3 r! R( r! i
其实我认为，透明带的缺失、以及如在制作嵌合体方面等都存在与显微注射相比较的不足。
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6 z- i% _5 y8 n0 j; _" \而且关于重合编程，我认为融合前对卵母细胞的处理即去核阶段，融合后对重构胚的处理是最重要的处理阶段，以为此时供体细胞与卵胞质融合而编程开启。但是，尚未付诸实施。