脂肪间充质细胞消化、收集的问题

swtarron

最近刚开始做脂肪间充质，脂肪来源为吸脂来源的。消化的时候用0.25%的胰酶消化，发现不是很容易消化，消化6-8min，消化效果也不是很好，还有大家一般T75和T225的长满的一般能收集多少细胞啊？求解答。

田甜

亲，不都是用胶原酶消化的吗？很少用胰酶吧。

swtarron

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可能没有表达清楚，我是说传代之后，冻存细胞前，把细胞从培养瓶瓶壁上消化下来的时候

田甜

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$ b* r& _6 V& B  p
/ |# U4 T" L* t% V9 |2 U, K哦，我理解错误。/ K! g2 e  ]& N# h& \
原代本来就不好消化一下，PBS润洗，去除残留血清培养基。不知道你的胰酶里面是否加有EDTA，一般0.25%胰酶-0.05%EDTA，这种组合好像对绝大多数细胞效果都还可以，要是还是很难消化，放培养箱，37℃消化。5 J2 e1 ]! X0 G) t  N% M. W% U
我这边做过原代，差不多80%汇合度的时候，原代消化每T75可收150万左右的细胞。# q) q6 N! c1 v5 F

奇幻雪蓝

swtarron

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你传代之后P2或者P3能收多少细胞啊

田甜

不知道你说的人的还是大鼠的，或是其它来源的。
9 b1 @* k, L& N我这边就猴子的脂肪干细胞计数过，P2、P3一般情况是300万-400万。主要是看培养条件吧，细胞状态好的时候就能收怎么多。

swtarron

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( U5 r' r" O" N7 u' v5 U8 W是人脂肪来源的，你是一个T75收集到300万-400万？

田甜

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今天收了一个人的P1代，一瓶T75收了约400万。培养基用的是无血清培养基，专门养间充质干细胞的。

swtarron

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( J. R6 c7 C1 B回复 田甜 的帖子0 ~" k$ z' O9 R
, g: k* q: g1 k; _; X8 C# }3 I! I
是脂肪间充质吧？话说我们做流式貌似脂肪间充质要比脐带间充质细胞大一些。那应该长满了吧，你们收集细胞的时候用的胰酶和EDTA嘛，消化时间大概多久，和脐带间充质消化相比难易程度如何？我上次一个T75长到80%融合度，消化收集后用输血器过滤计数只有250万左右，为什么我的这么少啊？