造血干细胞流式检测结果分析

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& Y: m9 N- X' l3 M" G
3 X3 o5 C5 u7 P3 ?这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候，基本就不做补偿，直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低，必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照（阴性对照）去调补偿之后，再测定单个的项目？

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" w8 z0 h, o$ c5 a, X
3 t: o4 F" A0 {& u0 |  h# e5 M. x9 n$ D好的，谢谢！您的意思就是：
  h* }' z, ]- ?; \/ C) s1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
! \: X7 S6 `; r- y, r& E2.测定对照管，根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。
$ b' f, |8 G* c3 m, E5 c3.检测样品管，画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2，FL2/FL4，FL1/FL4的十字图吗？

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回复 nailute1985 的帖子: U) Z( |! a! q$ M2 j3 V. I4 M- i
) A7 A9 z: F1 x2 ~4 H( {# @) s
我想了一下应该是这样：$ O& Y3 m7 r$ ^2 E
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,5 \( C8 |6 @% [/ \: E
2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体( q: h- e1 S$ C  |5 g4 @
3.补偿调整管：需要3管，一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体，以此类推
, x7 v7 p, y* W& [5 Q1 u4.根据检测情况调补偿，调至合理范围。通道之间无荧光干扰。/ @+ W$ ]. n+ k6 i5 F- l& b' |& H
5.检测样品管，并分析.

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! d) f' s8 l* S7 z& b+ t
2 I* u" B, g# {) o您好，最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。8 X% ^* U$ G: j# E
1.在检测同型对照的时候，是需要先划门吧？这个门怎么划？- y- n7 n, U! n" S8 E
2.在调补偿的时候，为什么3和4通道的荧光没有干扰，不需要调整呢？而1和4通道反而需要做出调整呢？
8 A  s# ^3 U) E. |% V/ x( N6 d3.我看文献上说，逻辑门R4显示出来后，还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的？

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' _2 q5 }, v" C. Y4 E/ g1 b- q7 N/ h# M. V4 O# T
R4门比较宽，说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群，然后设为R5，然后重新简历FSC/SSC散点图，把R4门复制到此图中，并显示R5，说门划到SSC最低和FSC在100的位置，这个200是左边起还是右边止呢？但得到的结果15%以上，这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强.
* |) _! o! T# b1 {, n6 A/ Y$ j+ P多谢回答！

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回复 nailute1985 的帖子4 H5 w8 R( O2 v( e# F, |

! m7 X, E4 _  T/ Q. k! l3 H- D  N1.CD34的门？不是从FSC/SSC散点图画门后检测3个补偿管（3个抗体）进行调补偿吗？
2 P" q( g) Q+ z' w& [2.然后这个画门的位置在哪里呢？

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% o! b2 a1 t; f( O2 z3 n  o9 t2 ]+ W4 A& V7 V5 {; Q$ _) z7 c

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2 [" S$ E; G) }. j
4 [  P' u8 |5 y" X# I都用同型对照了，还有什么阴性对照呢？难不成还得用细胞做阴性对照，不是多此一举吗？

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回复 nailute1985 的帖子& @7 {3 j8 E& Z* e8 m) E  |
9 m: t$ ~3 c) q' b
我们是用调整过的R4（在FSC/SSC的散点图中，显示R5，把R4的图复制过来后，把门的左侧划到200位置）作为最终的结果，大概0.2%左右。