终止胰酶消化的培养基量的定位

1195963542

MSC加入胰酶消化一定时间后，需要进行终止消化，那么终止消化的培养基的量是不是≥胰酶的量即可，可以＜胰酶量么？ 这个量是根据什么定的   

watchen198891

回复 1195963542 的帖子7 ]7 K# W6 }' y

  {9 J3 b- L5 x) v8 _最好过量一点，另外还要看你胰酶的浓度，终止最终只是防止细胞消化过度，让细胞状态变坏。所以过量一点比较好。

yooung

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( ~0 N& V0 ], V6 |$ S# ?/ V& W  R3 R" p/ M
这个问题值得好好研究。
- G* O" ~$ D' \我认为在确定终止消化的培养基量这问题之前，应考虑另一个问题：培养基能终止胰蛋白酶消化细胞的原理是什么，即培养基为什么能终止胰蛋白酶消化细胞？& B5 @/ i/ a) O' I7 u
我查阅有关资料，总结出几个可能的原因：. E; t/ R0 m9 G8 D
1.胰蛋白酶抑制剂作用：培养基一般含有血清成分，而血清中含有抗胰蛋白酶成分，即胰蛋白酶抑制剂，能抑制胰蛋白酶的酶活性，如抗凝血酶Ⅲ等，终止其继续消化细胞膜上的蛋白。胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,而抗凝血酶Ⅲ则是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂。
5 ^/ E# U7 X0 y2.竞争性抑制：培养基含有大量蛋白，这些蛋白与细胞表面蛋白一样，作为胰蛋白酶的底物，来和胰蛋白酶来结合，使细胞蛋白和胰蛋白酶结合的机会大大减少，从而起着终止胰蛋白酶消化细胞的作用。; r: i) b- Z/ ~
3.钙、镁离子的作用：培养基中的钙、镁离子可能影响胰酶的消化能力，导致胰酶消化能力下降。4 ^% L  e+ `% v
4.稀释作用：胰蛋白酶消化细胞的能力与其浓度有关，加入的培养基使胰蛋白酶浓度降低，使其消化细胞的能力减小，故能终止消化。
; ?8 l% p& F$ Y  o. T. V从上述可能的原因来看，终止消化培养基的量应该要比较大，这样终止效果才比较好。查阅有关资料可知，终止消化的培养基的量至少要大于胰酶的量，一般为胰酶量的3~5倍。

daviddow

相同数量的培养基就可以

zhouweixing000

原则上1比1就能终止消化，但是经验告诉我们还是要多加一些，稀释一下细胞浓度，这样贴在平皿上或者培养瓶上的细胞就会少一些，浪费也就少一些

小猫狸狸

一般来讲培养基与胰酶等量即可，完全可以终止消化。但是实际操作中，可以多加一些培养基，细胞的状态会更好一些，损失也会更少一些。

feifa1314

要注意的是，在养MSC时如果使用的是限定化学成分的培养基，就不能直接来终止胰酶。而是要额外准备胰酶终止液。

jiefengbing

一般来说，1:1的比例就可以了。在操作的过程中，自己摸索一个浓度，以细胞状态不变差为标准

jddakui

一般情况下1:1就可以，因为你马上就要进入后续操作，离心  清洗 等等  除非你样品量特别大，可以考虑增加比例，防止后续操作等待时间过长而消化过度

saliai2016

建议培养基充足的情况下多加一些，由于是在对一些难消化的细胞进行消化后，还会进行吹打，若培养基过少，容易产生气泡，气泡炸裂也会对细胞造成机械损伤。