求明胶包被培养瓶的流程步骤

pydsn88

如题  课题组没人做过 ~~包括明胶该怎么灭菌 我觉得这个好麻烦啊 主要是不好过滤

星光灿烂

这个我觉得自己做的话会很麻烦，而且每批的质量不能保证，鼠尾胶原和明胶都有成品买，也不是很贵呀

shihuijunm

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) k& V. @5 e( _7 Z& D) }
我们实验室用的是这个，你可以买: c- M0 L7 b) z. H; N5 U5 C
gelatin form bovine skin (Type B powder bioReagent) : n: T& U( d+ g. V
suitable for cell culture ) f8 \$ N( s3 f0 K  @8 x
sigma G9391-500G
0 \7 ?; c* j1 r% a; b# y* m; LCAS 9000-70-8
* I8 x# L$ }- t- a( @2 n用的时候用去离子水配成0.1%浓度，高压灭菌后就可以直接用了，用的时候放在37度培养箱跟培养皿作用30min，或者包被过夜都可以。

xiaolizhang87

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* a# Q8 N( X; {! T. V5 T* x" G$ I- c* Y. |9 C
我们的做法是：sigma明胶粉末用DPBS溶解，于121℃，灭菌30min后，于-20度长期保存。包被之前提前一天4度过夜融化，用之前平衡至室温，随后用于包被（37度，1h；或4度过夜）。最好现用现包，不要包被好之后放置时间过长，会影响效果。

embryonic12

请问包被过程的具体操作，把胶放进培养皿就行了么？

星光灿烂

我觉得你是对包被这个概念不太了解，其实很简单，就是把你已经处理（灭菌、稀释等等）好的明胶溶液加到你要包的培养皿中，以能够覆盖培养皿底部为准，哦，要稍稍多一点，不要为了节省就加的量比较少，否则放置一会还会出现覆盖不满的状况。加好之后放于37度，1小时或者4度过夜都可以，这样明胶会均匀贴到培养皿的底部，用之前用基础的培养基洗一遍或两遍就可以了。

pydsn88

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2 }8 i: d1 S! w0 G: ]/ `9 S
. Z; q7 Y* ~, l3 }- Z非常感谢 我买的跟你们一样的 还想问一下，高压灭菌完了 你们还用0.22um的滤膜过滤么

pydsn88

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! J2 t, G+ S1 D. L' F
% \5 |! D" ?% J  y1 B* }非常感谢 这些经验真的很重要

pydsn88

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* ^) D/ P& G, ~  J* @: H- V/ Q2 T/ k4 y9 H
应该是把胶放进培养瓶 孵育过夜之后 再冲洗掉 要的是站在瓶子壁上的

pydsn88

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; i2 l0 X- B7 K( S6 J
% T. e9 a3 a; x" Y/ A0 l$ W% |您是说 无菌液体包装的那种么  我就觉得好遗憾 我定试剂那会赶着圣诞节只有国外有货说得等个半个月才到 一心急 买的sigma的无菌粉剂 还要自己配 无菌操作最犯难了