求助关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

我做的人骨髓间充质干细胞用的一下方法，但还有些细节不是很确定，请有经验的大侠给与指点:
  }! M' E- }9 c6 y! Y* B8 m1 骨髓原液加等量PBS混匀、离心600g/10min，洗涤去上清4 v% C; y2 ]: V7 @+ f
2 加等量PBS混匀，缓慢冲入FICOLL中，比例为骨髓稀释液：FI=2:1，900g/30min，离心，吸取白膜层
$ \( B! V# N: x4 F- P3 加少量DMEM混匀，600g/10min去上清，将细胞悬于DMEM中，接种皿，放培养箱培养。
- j/ E; U" Y. ^8 q8 Y4 三天后，全量换液。5 A! Z4 t) c3 ]6 {, j* q' z
: f/ ?& x. X- `6 V) P9 Q7 E
三天换液时，因怕反复冲洗冲掉MSC，我只是将PBS倒入培养皿中，然后晃了晃培养皿然后就将PBS吸走了，只洗涤了一次就换液了，此时这步骤是否正确，是否需要充分洗涤三次再进行换液？
8 s2 M' i# O* z4 o  G% j还有以上的细节那部分会有不妥，也请各位大侠给与指点。非常感谢！

camus

MARK一下，学习学习

dimi_luki

学习一下，最近开始做人的间充质干细胞了。。

wcforever126

回复 sunjianhua2000 的帖子
( F7 f: ?  B% d# I/ u* |+ C- B  U3 u+ l
您好，您用的FICOLL是多少密度？  a  r* ?/ I* A/ n' U+ a# G" ~- [

wcforever126

回复 dimi_luki 的帖子
& [) g" `8 A* n' [5 @. J. Y
' q( P4 a9 Q; ^2 x2 |* [2 ?您好，想请教您些问题，小弟最近开始做人骨髓间充质干细胞这方面的，从提取这步开始做的就不是很顺利，麻烦您看下我的步骤有没有问题，谢谢。7 I* ^, K* u4 E& D
麻烦看下小弟提取步骤有没有问题：骨髓：生理盐水=1:1，Ficoll-Paque PREMIUM（密度1.077）：稀释后骨髓标本=1:1，离心2000转，15分，20度，最大加减速4/3，中间白膜用生理盐水稀释至10ml，1500转，4度，8分钟，最大加减速4/4，重复2次，加培养基。% G7 F1 C1 I+ `
可不可以把您的步骤及注意事项发给我，我邮箱823293603@qq.com，谢谢。

liuyul03

很多人在用全骨髓贴壁法，效果也很好啊。
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liuyul03

很多人在用全骨髓贴壁法，效果也很好啊。
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