贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：" k. o% ]* w4 p' R. n: c  Y) @2 F" q
一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。/ g/ W6 \; ]$ x. K7 l/ t
二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。
* l3 O9 E' c, Z9 v) k# x6 u2 F9 Z# T+ r! ^: r5 t8 p& \9 ]; L
问题1：) ]% Y. i2 R7 T* P4 a* W7 O
网上看到的脐带结构的说法是否准确？- o( v2 O, V1 X1 @
问题2：2 C$ T( }, p: Z! o$ P+ @
处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？
2 W$ N+ @$ V/ l6 P! }问题3：+ d; U. ~7 S/ M7 s  o- Q) \& }' Z
里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？
& u: N; Z4 @- |0 j. l; [( B问题4：; S- V; I, |( o0 p9 b6 b# K
一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？
! M1 U, }+ [# @8 M* _) Y; G$ X

wuhuaguo88l

问题1：网上图片还是比较准确的! p# O! S. Y# p* K4 B
问题2：一般是要去除羊膜的1 `8 }6 p# h  @! B9 E, n2 \8 @
问题3：去除三根血管和羊膜后，剩下的都可以用来做原代
* J0 f8 |. S$ b% C/ P) j问题4：剪刀剪碎比较方便，手术刀貌似不好用。

haibara007007

1：结构非常准确，就是这个样子
3 p9 z$ o- o) c; T( g2 D! j/ Q2:去除比较好，不然细胞会有一些显上皮状
2 o: |( y) j$ o4 L" i0 P3：可以不去除3 b! z6 x9 e2 R
4：一般都是用剪刀，区别的话，这个还真没做过

chuanbaozang

同意楼上几位的回答

fuyinsheng

1、结构没有问题$ W# ?0 g2 R8 I' G/ a7 O# k/ r
2、一般需要将华通式胶单独分离下来，以确保细胞纯度，因为羊膜上皮细胞生长条件与间充质相似，已造成混杂$ d  H! A) z2 ^% l; @- g
3、去除血管的同时尽量将残留的血管壁等杂志从华通式胶上分离下来. I/ S( f# g% A' Y8 c  ~  L
4、刀切的组织块相对较大，降低了细胞爬出的效率，剪刀更细碎一些

月_幻影

1.结构正确；
' Z( R. R3 I- n& J, G7 i9 g4 M( Y2.做原代一般建议剥离羊膜；+ p; `  T  B& n) @1 w& q
3.我们做的时候一般是将脐带剖开，去除三根血管然后直接用镊子从羊膜上往下撕华通式胶；
: t3 H4 d* |/ B* o4.通常使用剪刀剪碎后铺瓶培养，用刀切似乎不太方便也没有剪刀剪得碎。

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子
' E9 h( ]* X% g' v0 x0 V; b! J5 R3 Z5 w  x  Q
我刚做时间不长，羊膜和华通氏胶有些分不太清楚，请问羊膜厚度大概有多少？

fuyinsheng

回复 jifengtang 的帖子
' M1 h9 G; E' W, c
6 t: U. ~  N- s0 X! R" T羊膜非常薄，百十微米左右，最外面一小层

小豆芽

1、结构式正确的；
* o3 S. |: Z- A  K! _8 ~& Q3 L2、在组织块贴壁培养时，一般是需要剥离羊膜的，这样可以保证细胞的纯度，同时也有利于细胞爬出；& ]; X. O, h6 _6 A) X
3、最好是能够去除，当然不去除也不会有太大影响，可以进行原代培养；" i3 P$ C3 K: V9 n9 B
4、用刀切的话，操作不如剪刀方便，而且刀切组织块比较大，没有剪刀剪得碎。

redmaple

为保证细胞的纯度，还是要剥离；
5 g* x. t- l% _5 ]; ]8 e不剥离，杂质太多，影响细胞的生长