求助关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

我做的人骨髓间充质干细胞用的一下方法，但还有些细节不是很确定，请有经验的大侠给与指点:
; j# r8 \# f' L1 骨髓原液加等量PBS混匀、离心600g/10min，洗涤去上清
( t& ?0 {/ t4 ~/ s$ b' z6 n5 v( j2 加等量PBS混匀，缓慢冲入FICOLL中，比例为骨髓稀释液：FI=2:1，900g/30min，离心，吸取白膜层2 [  Y2 K2 i5 m9 R. [$ j
3 加少量DMEM混匀，600g/10min去上清，将细胞悬于DMEM中，接种皿，放培养箱培养。& P6 [* s4 n& a' T8 u
4 三天后，全量换液。' P2 M& s2 D5 h
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三天换液时，因怕反复冲洗冲掉MSC，我只是将PBS倒入培养皿中，然后晃了晃培养皿然后就将PBS吸走了，只洗涤了一次就换液了，此时这步骤是否正确，是否需要充分洗涤三次再进行换液？
' L+ H) Y; r1 R还有以上的细节那部分会有不妥，也请各位大侠给与指点。非常感谢！