干细胞老化的问题

tingting2113

最近复苏的间充质干细胞活力总是不好，出现细胞变大，多核，停止生长的现象。但是细胞才第二代第三代左右啊~~是老化了吗？为什么呢？形态类似附图。7 {* D) O2 T% p- N% W! F- T
大家帮我分析下，有类似经验的，请多多指教。

baby00000003

图上这个肯定是状态不好，不过也不一定是老化。
# ]6 o( S% M2 i, s培养条件（培养基、血清、培养箱、接种密度），冻存和复苏的手法什么的也可能有关系' [" ^3 F: C# ^  G& E8 P! _
也许做一段时间（1、2个月）就好了

tingting2113

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! o6 w5 y$ L5 D& h( k. I4 i  \2 s7 \* V2 B5 e/ v& n
10%胎牛血清的DMEM，培养箱应该没有问题，因为别人的细胞生长的不错。" [4 W# C5 q) }; Z0 C
冻存：冻存液DMSO：胎牛血清=1:9  取0.8ml 配合0.8ml 细胞悬液。（他人冻存，密度不详）# G+ F/ x  W/ t5 ~6 \
复苏：从液氮罐里拿出来置于塑料手套中，然后之家放在37度水浴中进行，待未完全融化就放进安全柜进一步操作，个人认为时间掌控的还可以。
8 ~5 O0 \" J' c. K. M7 l现在就是不增殖，如果忍不住给消化了，直接死给我看！！

baby00000003

回复 tingting2113 的帖子/ r, ^, j5 D7 U) D$ u; i
0 b4 ?3 s: ~8 }7 {' k
虽然不太清楚具体的情况，提高一点接种密度试试看？6 ^$ ^# B$ q) t/ a" t/ {
比如10000/T，看它长得好不好～

zxd962735279

间充质细胞的代次低的话，杂细胞的量比较多，会有些细胞会死掉，还有就是初次复苏的细胞密度应该大些，细胞密度低长的就慢

帝国黑骑士

回复 tingting2113 的帖子/ R0 }  k0 R. V' @0 G: H
1 y4 Z1 o" n( Q3 Q
你这是多少倍观察的啊？你冻存以前细胞生长状况如何？下次冻存细胞的时候可以直接用配好的冻存液重悬细胞冻存复苏再试试。

tingting2113

回复 帝国黑骑士 的帖子5 L* c- I. o! r3 m

: U! w8 s6 W  K+ J不好意思，这个并不是我的细胞的图片，但是我的和这个是一样的。之前是细胞生长状态挺不错的，但是这批细胞挺长时间没用了，期间搬了一次家，但是一直放液氮罐里应该影响不大吧~~; u+ H: z5 v3 J$ s5 F  @6 f
您说的方法我会试试，谢谢

tingting2113

回复 zxd962735279 的帖子
. d+ v' ]' C" m4 W  {8 G, }6 L8 Q- u9 c4 m
恩，谢谢

tingting2113

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* d; c" T7 b2 E* ^$ k' r2 G1 f' G8 ?- y9 R$ a
好的，谢谢

tingting2113

回复 帝国黑骑士 的帖子: _7 x3 E2 Z4 Z3 `

/ V$ P1 ~; w3 V4 A7 [0 Z7 R1 o实在不好意思呢~~现在还没有权限加好有什么的~~~