如何使淋巴细胞分离液密度梯度离心后分离的细胞层明显清晰？

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如何使淋巴细胞分离液密度梯度离心后分离的细胞层明显清晰？可能是离心机的使用，转速调制3200r,单核细胞层仍有部分红细胞或其他细胞，分离出的细胞层不明显。

wangzhiqi86

把你要分离的细胞混合液慢慢的滴加到淋巴分离液上，最好沿着离心管壁流下，离心机的上升和下降都要选择最慢加速度，因为淋巴分离液是根据单核细胞、红细胞和其他细胞的密度分离开的，这几种细胞的密度本来就相差不大，所以一定要慢。如果离心结束后，中间有一层薄薄的白色细胞层，那就是单核细胞，离心管轻拿轻放，切忌过猛。

shan

转速2000试试

月_幻影

加液是手法缓慢些，可倾斜离心管沿着管壁缓慢加入，放入和取出离心机的过程也要注意不要晃；离心转速有些高，建议下调

genhaoxin

把要分离的细胞混合液缓慢的加到淋巴细胞分离液上，细胞层和淋巴细胞分离液分界层不被打破，离心力400g，下降时加速度调到最慢，离心管在整个操作过程轻拿轻放。

鸵鸵

3200r的转速过高，会损伤所需的细胞，建议下调，2000r左右就够了，缓慢加液，慢升慢降，另外不同厂家的ficoll分离出来的效果也是不同的，国产的没有进口的效果好，你可以换下品牌试试

jinhaifeng

血液和生理盐水稀释的比例应该是差不多1:1，离心的话不应该看离心转速，因为各个牌子的离心机是不一样的，建议800g，25-30分钟，你可以试试，效果应该会很好

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回复 wangzhiqi86 的帖子/ a% t- W' ]: P! g! Z

0 Q- P# M$ `  h  G; U非常感谢，离心机最慢加速度的原因没有考虑到。加细胞混合液时速度和时间不太好控制。

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好的，我试一下，谢谢

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回复 月_幻影 的帖子6 m5 f6 U- I6 E% t

, Y+ N2 j4 n9 q2 {+ b$ R7 j, ~离心管倾斜，如何控制平衡？此时需沿壁缓慢加入，有点难度。求教妙招？