CIK培养中的单个核细胞的提取

long3390hai

在提取单个核细胞的时候，自体血直接上ficoll的培养效果和先离心，取上清血浆，56℃灭活，再加PBS稀释之后上ficoll的再培养的效果那个好，加不加自体血浆影响大吗，对流式表型有影响吗？

yaxiao5708

添加自体血清，细胞长的好

long3390hai

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/ q/ Q, r. E, J% A7 K我想问的是直接上FIcoll和离心之后，取血浆再上Ficoll哪种好，影响大吗？, Z, @0 D# v. f! O& O; J% G" c

老姜

1. 血液用Ficoll进行分离单个核细胞，熟手操作必定比生手收获的多，当只有自己操作时那Ficoll的质量对分离效果的影响就要重视，一般进口Ficoll分离效果好于国产的。你说的两种方法均为常用的方法，并不好说哪个就好于哪个，你一定要结果只有自己将同一份血分成两份，用两种方法分离对比，是获得最佳答案途径。
, X3 g8 |( `# {& O2. 至于培养的效果，Ficoll分离后一定要用PBS进行洗涤，一般洗三遍。Ficoll中的有些成分对细胞的生长有影响，应该洗去。
( n+ v5 I4 g: v* y, W0 ]3. 是否加入自体血浆？不加细胞也能长的很好就不必增加工作量了，细胞生长不好可适当加些，因自体血浆的营养成分的种类并不是各个足量。动物血清制备时也是将多只动物的血清进行混合制备而成，这样有成分互补的功效。
1 K2 U1 ^0 z$ J2 K6 ^4. 流式测定及时最好，若不能及时测定就乙醇固定细胞后4度储存，一周内测定，流式是测细胞膜表面的标志物，细胞活率高测得的数据更可靠。制备的细胞悬液中有细胞结块现象，测得的结果就差些。

long3390hai

谢谢你的解答，很详细。

小刘

当然先去血浆，因为免疫细胞添加自体血浆会增加它的增值能力，一般，3,4,5,7天添加自体血浆，要想得到好的分离效果最好先用PBS稀释后再加到分离液中。

long3390hai

谢谢!- m) Q! h% B# W+ ^6 R. L

yuanyecat

根据试验情况来看，如果用无血清培养还是很难达到用自体血清的细胞数量。表型一般没有多大影响。但是最好用自体血清，cik细胞数量收获多

yaxiao5708

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从我们实验室的使用来看，取出血浆，盐水稀释血液后再用ficoll分离白膜层的效果更好，更容易提取白膜层