请教流式达人帮忙看图

baby00000003

先上图
+ x8 E- F- o. D9 T

2015-5-21 14:18 上传

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% M: M# X( s& [; H0 D( n$ O

2015-5-21 14:18 上传

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! ]! h, Q) `; ~9 D: R7 E$ R这是同事做的1个CIK细胞样本，培养时间、条件、制样过程一概不清楚
" W) r9 a6 R* b+ p5 i8 d想请教各位有经验的老师们，为什么图上的细胞没有明显的CIK分群呢？
& p2 B  F4 d8 ^5 Z1 m8 A图上圈绿色的一群是为数甚微的CIK么？
7 D6 {, z- K' `3 B- Q% F图上红色的一群应该是细胞碎片吧？
2 k* y$ H" u9 C! S* d那图上蓝色的一群又是什么？* i" R; b: V" H$ t2 o

/ K' K2 {4 a, f# w4 x' u追加信息：" B$ Q# z. ?" Z
1，右边的图是CD3-FITC／CD56-PE的双标荧光，据说圈中图上蓝色一群几乎没有任何阳性荧光
* s- b1 Y! c7 v2 ]/ G' X1 d. Q2，镜下观察细胞有非常明显的老化形态，如边界不圆滑，颜色暗淡。即使形态尚好的细胞也看不到分泌颗粒
: D; J. v' N  S0 O8 ?% c& D0 I3，细胞来源为健康的年轻人，无不良嗜好，采血前无饮酒、服药等行为& n+ j9 H0 G0 e& s9 O# {  H
4，采样时间为培养开始后的D14
8 M; l/ T$ t5 I% q% D6 e0 F  H. v4 a" ?$ M" S( {, [2 I3 V' V
麻烦各位老师帮忙解答～

元杰5

能先做个荧光补偿吗？……红色圈一般认为是碎片，绿色圈没有明显的参考价值，

Jonathan

SSC-A跑出去了好些。下次电压可以调低一点。

baby00000003

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6 p2 [" R! w/ [" T0 @7 D7 ~
$ u. Z/ V/ h1 n* A9 [9 X$ I9 e据说就是这个绿色的圈稍微有点各种阳性，多谢解答，俺会及时转告滴～

元杰5

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/ P. w* u( H2 Z7 F# [8 H% k
0 H: d2 |* L5 q0 x我看的话，FSC/SSC图只表明细胞的大小、粒度等特性，跟是否表达某表面抗原没有关联

ccst4838318

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1 V3 L/ b$ B) E1 T: K8 ^+ k+ y( u; A& w8 K2 C
绿色圈就是CIK大概的检测范围了，但是你这也太少了，基本上全是转化成其他淋巴细胞了，调下补偿和电压吧，效果图或许会好看一些，但是单看图片，你这DC-CIK诱导的效果是很不好，检测出来估计连10%都不到吧

lccsiais

嘿嘿，散射光图上圈了门，你FITC-PE图上也没有把绿色门的细胞单独显示出来，不好判断。另外图上阴性细胞群顶上那黑色细斜条都是死细胞/活力不佳的细胞，看样子这部分也太多了点。可以加个DAPI，sytoxblue什么的（405nm激光激发），染一下死细胞，把它排除（绝大部分）。
. {) s. T- b- ~5 H8 u$ I" H不知道这是怎么测的，用561nm激光激发PE，不受FITC干扰，几乎无补偿了。

baby00000003

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# _1 q/ {! ~% A5 x& y. b8 L
. A0 v" g6 j2 |; ]  G; h多谢解答，俺会第一时间转告～

baby00000003

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; Q* R9 m! U2 a4 y2 `; L6 E# c
( C. u$ n$ D( ^  ], k& _多谢解答，俺会第一时间转告～