【跪求流式大神】分选的流式图总是shift

dollar007

回复 zz091115 的帖子
( u- m& D; Z: l" o$ b
9 p4 h' n2 r2 [举例说明：
( P, V' y1 l4 e; A+ y调研下华人的身高、体重。调研员仅仅选取了欧美的华人取样分析，显然这样的调研数据会shift，欧美的华人是喝牛奶的，比我们这些吃米饭长大的身高、体重要大。* m) F1 |" s& J' X% I4 Q) \1 Y
我是怀疑你阈值没设定对，你的目标细胞有大有小，你的仪器设定天然的将一部份小细胞屏蔽了，实验结果仅仅显示了大细胞的特征，所以shift。
1 P' d! q- D# e. K/ c% j个人推测。以前我也碰到过类似问题。空白本底其高无比，峰移出了阴性置信区间。

yuanyecat

回复 w343989328 的帖子( N- K* r* U0 ]0 v1 U
7 b6 C% o6 @) f; D& A; D' @
你有没有做iso抗体看看非特异性结合,我觉得你这种情况是非特异性结合造成的，不用太在意和担心。

zz091115

刚才没仔细看你的实验 你是两步法 一定要用IgG做对照 另外 没人有Ho33342区分死细胞 Ho33342是做SP用的 活死细胞都能染上的 你需要用DAPI或是7AAD 调阈值对于信号不会有任何影响 只是机器把输出信号小于阈值的部分不显示不记录而已 问题在于原代细胞不是一个纯的细胞群体 所以斜角问题和粘连很严重 你可以用FSC-A FSC-H 来区分单细胞和粘连群体 你去看看文章 做上皮细胞的 比如肿瘤 都是斜向的 所以没关系 不用担心 做好对照就OK了

zz091115

刚才没仔细看你的实验 你是两步法 一定要用IgG做对照 另外 没人有Ho33342区分死细胞 Ho33342是做SP用的 活死细胞都能染上的 你需要用DAPI或是7AAD 调阈值对于信号不会有任何影响 只是机器把输出信号小于阈值的部分不显示不记录而已 问题在于原代细胞不是一个纯的细胞群体 所以斜角问题和粘连很严重 你可以用FSC-A FSC-H 来区分单细胞和粘连群体 你去看看文章 做上皮细胞的 比如肿瘤 都是斜向的 所以没关系 不用担心 做好对照就OK了

zz091115

另外提醒你Biotin的流式抗体只要4度15分钟就够了 你的非特异信号太多了 另外一个抗体你最好查查是不是可以做流式 如果可以 15分钟足矣

zz091115

你的流式根本没有能激发Ho33342的激光器 你用这东西搞笑了啊 DAPI你也不能用 你可以考虑用7AAD （PerCP5.5通道 488激光器激发）或是Draq7 （APC-CY7通道 633激光器激发）来区分死细胞 先去问问有没有那个通道 不要乱用东西

zz091115

还是没看仔细 来回翻页好麻烦 你可以用DAPI 358激光器 可以 Ho33342和几乎所有通道有点补偿 所以很不好 ' h5 w& O! u* H, `$ z' P& ^