RNA干扰问题

lorey

新手刚开始做ＲＮＡ干扰。目前只有RNAi的片段，还没构好载体，想用瞬时转染做目的基因的RNAi，然后提RNA用定量PCR检测该基因下游基因的表达情况。请问瞬时转染的话，多长时间能作用到下游基因呢？

cjsbaicai

这个跟胞内的相互作用的时间，及转染效率有关，作为实验，建议先做一个预实验时间梯度，然后再选取合适时段做时间梯度，其中时间梯度最好以小时为单位

liuyasi2008

先用一个带GFP的空载做一下预实验摸索一下实验条件，转染效率的话最少24小时可以观察有没有GFP表达，一般干扰的话48到72小时收细胞提RNA就可以。

yuanyecat

RNA干扰的话，一般48小时检测比较合适。还有你一定要做阴性和阳性对照。

lorey

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谢谢，我试试摸下时间梯度！

lorey

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谢谢，但是质粒的转染效率和shRNA的能一样吗？

lorey

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+ I- v4 b- w! A* E1 P! Z- h0 h* I# u" o8 h谢谢，有阴性对照，但是阳性对照没做。。。

daviddow

24小时就可以了。