请教各位老师有关流式检测CIK细胞成熟程度

baby00000003

CIK培养第六天，按照常规方法，2.5小时分离，加IFN-gamma，大约26小时加anti-CD3、IL-2、IL-1a，最长3天换液1/2，培养基变色立即换液，保持细胞密度不超过2*10^6/ml- ]- |+ U* Y; o7 z# \
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今天取细胞样本跑了个流式，但是CD3，CD56阳性率很低的说. d4 l2 F3 D: v0 N0 ?& {5 I
下面是这次跑流式的图，
  C! [. r* s( I: C' \6 O因为前辈遗留了一部分抗体，都是PE的，没法做双标，不过第一次实验，当作是趟地雷省着凑合用了- z- y' P2 ~: B5 s
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想请教各位老师，
1 R7 x* l# Q; E; ~有可能导致CD3、CD56阳性率低的原因？% Z5 l& Q+ h  i% p* G2 w& U
有关FSC和SSC画门，像图上这样画是正确的画法么？: X; Y/ v& y+ K3 b/ ^3 n" h/ k
我觉得如果靠诱导单核细胞成熟而生成CD8，是不是应该像这样把单核和淋巴都画进去呢？
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dollar007

1确定下你的试剂有否过期；2 V- i4 K* Q( U4 X; O. U
2对照FS/SS分析图中，碎片和死细胞过多，设的门框了部分碎片和死细胞；可以通过调高FS域值屏蔽掉部分无关数据信号；8 K7 C: z% d. K0 R! k8 o+ h
3对照直方图中，单线门设的过右，就把它设定在右边锋和X轴交叉的地方，拖尾的部分可以容忍，一般对照不会出现，细胞养不好，制样差就易出现；
' L" ~- l: D0 x# h! n4然后再看看你的样本数据分析，是否双阳提拔起来了？

baby00000003

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) |/ x; a0 n/ W1 ~# ~1 q% A# c您说的门框内的死细胞和碎片指的是哪一部分呢？
+ W0 t5 A+ W7 L是说70/70范围之内的都算么？
, a6 r' V& j" ?' `我还以为最角落里的是碎片，临近角落的那一群是淋巴细胞......

dollar007

左下方的是碎片；目标细胞在你的图中靠下方一点；左边的是死细胞。

dollar007

你培养过程中，要更换培养瓶，这样贴壁细胞就去除了；分离后红细胞残留不多，在培养中不增殖，很快就会成为劣势群，比例不高。

lyj-0017

回复 baby00000003 的帖子& j! A) G' Q6 B7 k1 `) }4 t

( N$ Q2 t6 ^. k! ?$ q! i" J% a从你的同型对照来看，阈值可以设的再大点，去除更多无关信号，圈门没啥问题，CD3单阳结果还凑合，CD56单阳的结果我认为可能与你培养没多大关系，估计跟你的抗体有关。你用的CD56-PE是哪个公司的，克隆号是多少？是抗人CD56抗体吗？

baby00000003

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  ?6 n, n  [) ?. P
0 S& ?! G. x1 L' @; `  _是BD的....555516,包装上说2016年才过期.......

lyj-0017

回复 baby00000003 的帖子/ Q( K0 [5 {+ X& i# Q1 Z6 X
1 m% Y( @# F9 x0 ~2 X
一般常用于检测人CD56的克隆号为NCAM16.2

hyg5481655

回复 dollar007 的帖子& t7 Y8 x; S- N( Z  E) L
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请教，调高FSC阈值，比如到50，000左右，除去部分碎片和死细胞，圈中的CIK那一群细胞的比例大概有多少？

细胞海洋

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