脐带间充质干细胞原代细胞培养

tanrufu

  之前一直用的方法是，组织分离再加酶消化法（胶原酶消化16个小时+胰酶30min）终浓度基本上保持两种酶差不多0.1%，以前一直按这个方法，感觉都还可以，基本上两三天都能看到有原代细胞长出来。但是最近处理了两根脐带感觉不是很好，想请教下同仁些，这个消化时间是不是有点长？缩短胶原酶消化时间是不是原代细胞的数量还是长出速度会更多更快？谢谢

Soso

和之前相比较，试剂换过吗？

jinhaifeng

干嘛要用酶消化法呢，现在组织贴壁法就挺好的，块的话5天左右就有细胞了，而且消化后对细胞的损伤比较大，影响细胞活性。真要用酶消化的话时间太长了，建议用酶消化2个小时，浓度2mg/ml，做胎盘干细胞我就是这么消化的，细胞长得还不错。

沙漠狐o0

就是啊，感觉组织块贴壁法要比酶消化法好很多啊。

qiaozhong.9876

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- Z# G5 t; D4 @( Z- A# A
' A' r$ n; r) M  \6 G3 T* H( Z8 f( D或许再换一根脐带试试，有的脐带它就是不长，我有一段时间，养了一个月才长出来

tanrufu

回复 Soso 的帖子# P* b! d8 m" J% X' R. U2 \, O
: g7 x- f, R3 l( S
试剂一样的，排除了试剂污染等情况，可能是组织剪碎过小，消化时间过长造成的

tanrufu

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组织块贴壁法也偶尔做过感觉有点快的要5天，慢的要一周甚至10天以上才见爬出来。你们一般组织块多大？我们0.5cm*0.5c左右

tanrufu

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$ K4 N( E, r, r% a
一般采集正常足月的脐带好像差异不是很大的

2013sp

你可以设置不同时间的对照组，然后比较哪种消化时间获得的细胞较多、较快。

chenchunlei

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" B' F6 c$ c3 Y5 ]% F, c
& s; n, C7 W- c, d( H+ E" s之前做过小鼠的皮肤，我们一般37℃消化半个小时，不会消化这么长，还有脐带现在不是一般用贴壁法吗，几天就会发现组织块旁边会有一些细胞爬出来，你可以尝试一下，实验可以多种方法去做，这样会提高你的实验进度。还有你养不出来是不是你的脐带运输过程时间太长，或者你的脐带运输液有问题。自己多找一些原因，首先排除你的脐带没有问题，然后就是你的操作和培养液。祝实验顺利