淋巴细胞培养中容易长絮，如何处理

草胞

培养瓶用因子包被后，培养淋巴细胞，容易成絮，大家遇到过这种情况吗，什么原因，要怎么解决好呢？如果不包被，直接刺激是否会长絮呢？

xiaostou

成絮状是死掉的细胞，它们释放的核酸将临近细胞纠缠到一起了，一般注意添液不会出现这个问题。不包被会好一点，因为包被的刺激比较强，细胞相对容易凋亡。

luoye1986

尽量及时补液，补液时混匀一下

tianangelt

遇到过不包被也成絮的情况，大概在分离后四五天，因为细胞异常就没怎么管，中间给补过液，大概十几天后，培养液变黄，镜下观察细胞大量扩增了，生长状态良好。后来就很少遇到这种情况。不知道我们遇到的情况是否相似？

xiaostou

如果出现了絮状，也不需要紧张，T细胞扩增还是比较容易的，一般剩下的细胞足够扩增到需要的数量。絮状细胞会随着培养进程慢慢散开，回输时候注意过滤一下细胞团块就好。

xiaostou

如果出现了絮状，也不需要紧张，T细胞扩增还是比较容易的，一般剩下的细胞足够扩增到需要的数量。絮状细胞会随着培养进程慢慢散开，回输时候注意过滤一下细胞团块就好。

lyj-0017

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+ i7 w3 L) `( t* Z7 F请问淋巴细胞刺激过强是什么意思？病人个体存在差异，如何知道加多少量刺激因子才能够不过度刺激呢？

xiaostou

回复 lyj-0017 的帖子8 f$ L0 `4 @0 q

3 x* r  e" ]1 A/ h. K8 ^/ P刺激过强意思是给T细胞提供的增殖信号过强，如CD3单抗浓度过大，刺激时间过长。此时T细胞的凋亡倾向增加（ACID），所以活化T细胞的时候不要给予过高浓度的抗体刺激。至于什么条件为最佳，那就需要在不同的培养体系下做实验比较了。对于临床应用来说，一般能达到预定的细胞数量和表型就可以了，我没见到哪个单位对优化培养条件很上心。

lyj-0017

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2 n2 Q! A/ Q3 W3 x" G/ N7 C: T" d& o+ y5 }  A: b+ N$ K6 Q; F4 u; f
       这确实是个问题，但是病人的个体差异太大，如果按照统一的抗体量进行刺激的话，应该会有一部分病人的细胞刺激过度，从而导致凋亡，最终导致该病人细胞培养失败，从这个层面来解释的话，应该是任何一种工艺都无法保证百分之百能够将癌症患者培养成功。1 f; O2 N( d! x# s% i
     至于培养条件优化的问题，不同单位应该有在做这个工作的，只是人家保密，不会公开经验而已吧。

minxianhu

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- C) x: S0 v7 a9 X4 G; N1 c: w# G/ e) K! N/ h3 w" Q
我们也遇到过类似的情况，但有时T细胞还是扩增不上去，现在补液时我们加入5%的脐血浆，细胞还是扩增不了。