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zzyhelixinxin

新手上路

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楼主

发表于 2014-10-17 16:27 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

慢病毒过表达质粒携带目的基因转染细胞后，如何确定内源性基因还是外源性的目的基因过表达？

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沙发

发表于 2014-10-17 17:09 |只看该作者

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5 s! Q( m: z# _5 C; @
用QPCR检测携带载体上的一段序列的目的基因即为外源性（也就是引物设计时包含载体上的序列），单纯目的基因做的结果为总的表达情况，总的减去外源性的即为内源性的

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chutu

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藤椅

发表于 2014-10-17 17:47 |只看该作者

楼上说的是一种方法，如果外源基因载体上有这么一段内源基因不存在的序列转录出来的话。还有一种考虑是内源基因转录时一般都会有5‘ UTR和3’ UTR序列，可以针对这些序列设计RT-PCR

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moluxingke

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板凳

发表于 2014-10-18 09:38 |只看该作者

不知道蛋白水平上的可行不可行，比如有带有标签的Flag或是myc，又或者比较正常的对照细胞和过表达后的细胞内蛋白量相对水平，如果过表达，同样的总蛋白内，特定蛋白的量肯定会多一些，当然如果你的表达指的是mRNA水平的另当别论。

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生命之轻

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报纸

发表于 2014-10-18 16:28 |只看该作者

可将外源的带上一个标签比如flag

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zzyhelixinxin

新手上路

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地板

发表于 2014-10-22 09:15 |只看该作者

谢谢各位

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hyde

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7楼

发表于 2015-4-2 14:40 |只看该作者

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载体上什么位置的可以用于设计呢# S- H6 H' E' |1 q( l6 d

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