流式检测细胞凋亡问题

小咪咪

最近做了两批细胞凋亡实验，第一次的数据还好，但第二次不知道为什么，所有的细胞都死了，做前状态还i挺好的，但结果却是这样。有谁遇到过这种情况呢？求指教~
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2014-10-15 11:51 上传

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依然可比克

     请问楼主用的是什么型号的流式细胞仪？该流式细胞仪是否需要手动调节荧光信号？第一次和第二次实验的仪器使用条件是否一致？如果两次实验仪器调节状态不一致，有可能出现实验重复性差的结果。& g: Q5 x) S. @8 G9 C1 t
     另外你的两次染色条件是否一致（例如染色时间，细胞收取方法，操作者是否同一人等）？还有建议楼主设立阳性对照（向活细胞加入过氧化氢等让细胞产生凋亡）和阴性对照组（完全没有进行任何处理的活细胞），来帮助你判断你实验组到底是什么凋亡情况。

小咪咪

回复 依然可比克 的帖子- r& z% Q- \; I0 E" c
( y. a6 ?) f: i, ]; d4 ~
非常感谢您的回答，两次实验仪器调节状态应该是一致的，因为我们这里没有条件，是送到医院帮忙检测的，那些老师做了那么多年应该不会出现实验重复性差的问题。你的建议我想跟我遇到同样情况的人应该可以参考。最近我也看了很多的资料，只知道我的大部分的细胞是发生继发性死亡，但具体的原因没找出来，不知道您有没有看过类似的资料呢？请多多指教~

顺其自然

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1 ~. ]0 f* B! a4 m! h3 I# l& p1 m1 g: z
请问下，如果设置阳性对照的话，所加的过氧化氢的浓度和体积是多少啊？+ {1 ^5 o9 s3 e5 S: ^; M4 s4 |# k- e
谢谢啊！

晴斗斗

做凋亡检测是要防止假阳性的，细胞染色后要在一小时之内测完，要设置好阴性和阳性对照；
2 k" u, P' x; v8 W4 k1 C, U两种荧光的话，还需要设置单染的对照以调整荧光补偿