小鼠骨髓移植整理 的 protocol 求 雅正

hyde

刚开始以为这个区是技术讨论区，后来感觉像文献交流区哈…2 l1 ^/ w/ Q; h
准备练习一下小鼠骨髓移植， 整理了一下protocol ，不知道可行性如何 ？ protocol 整理.zip (5.63 MB)

2014-6-23 21:47 上传

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* l: l* ~7 J. I4 c. [. l6 ~8 k. |1 p+ f; s9 w3 r
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hyde

求实战者指导改正
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goblinwang

一只老鼠可以得到10X7的细胞，受体只需要2-10X10X5就行了，C57小黑鼠做尾静脉，难度大，手法需要练习，注射器最好不要用1ML的，针头太细，冲骨髓的时候，容易产生机械损伤，致死剂量照射，未处理的话，一周开始死亡，我是一次性照射10Gy,照射的时候最好密封无菌处理

hyde

回复 goblinwang 的帖子! h0 Q: F$ v; S" [+ l

% w8 W' \" ~0 ?如果分离的细胞不进行流式分选出干细胞也只需要这么少细胞吗?

hyde

回复 goblinwang 的帖子# w  G4 g, Q* ?' w1 H1 y6 q7 w! T

; q' T6 a8 u! C. b9 [" y小鼠的性别有关系吗
- {# h# x- `; p$ U

sysuhoo

按照我们实验室的经验，Co60照射与你的实验目的有很大的相关性，看你是做半致死还是致死，而且更重要的是剂量没有定论，一般来说体重和周龄对于照射剂量非常重要，我们的经验是20g左右，8周龄选用8.5Gy比较好。最后的成功标志以嵌合率在85%以上为成功。( h% m. u9 A: [. k: R4 h
另外小鼠的性别对实验的影响不大。

hyde

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0 g7 O! a$ `6 f7 a5 [0 \* @& ?9 V5 n4 h1 K7 U
嵌合率如何判断？取细胞做流式分析？

goblinwang

回复 hyde 的帖子* g- x1 x+ S5 a# I9 l6 q- q

0 w- M: T9 O0 P) X% |* r! M! j按理论看，每10X5个BMcell就含有一个HSC，而一个HSC就足够重建整个造血系统了，性别最好一致，不过获得的细胞含量，没差异，受体鼠，最好用公鼠，至于嵌合率，那你是用CD45.1和CD45.2老鼠进行BMT，这样也只能流式了
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hyde

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; t1 v4 `8 W) j
- t1 Q% C! z$ J8 j; b+ H( f1，关于抗生素，国内外环境不一样，国内一般用的比较重的药物是吧，有什么推荐的？有文献说ph水太酸小鼠会不太喝。  需要每天换饲料换水吗？
% B0 S; L1 y" {/ a; \& G/ {2，有的文献说分离骨髓细胞的缓冲液不能加FBS，有些又可以，（最后重悬的不能有血清可以理解）-------我的理解是开始分离的时候可以有，后面快注射前的几步清洗就要去掉，防止对小鼠的影响？

goblinwang

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5 g( Y% S  Z; q/ C- U, N& b
7 X: ]: W" o( t. q4 U抗生素，你看参考文献就行。这应该没什么问题，我的水不是酸处理的，不用每天换。FBS的使用，我的理解和你一样，