无饲养层培养干细胞

flyjing

各位大虾，我马上要无饲养层培养小鼠胚胎干细胞，不确定培养基用什么，各位大虾有知道的吗或在培养的吗?不胜感激

defu

条件培养基

plainxie192

2i/LIF体系可以的。

孙帅帅

E8就行吧~~

michaelgibh

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- B. C7 e1 m% p
5 B" g, O* m; r" CE8不是用来养人得干细胞吗，养鼠的也可以？

碧螺春的秋天

N2B27 2i/lif

zm19900508

2i(50ml) avoid light
* L4 K: K" O: G  ^# v9 h$ rDMEM/F12                24ml
' b7 |8 B; l4 |1 SNeuronbasal                24ml0 Z7 d, `% N7 i) w- ]% v
L-glutamine                100*
( t& |0 _+ T. s1 @3 q' L1 s9 wNEAA                       100*
1 ~9 S" c5 a3 o$ rsodium pyruvate              100*! ^( t$ o3 C8 X. z& J
penicillin/streptomycin        200*9 a4 e) B0 R9 @/ U
2-mercaptoethanol            92ul
$ x1 B! u) X* U! }0 j/ yN2                         250ul" O! V5 L7 _* ?# O! v( |* W
B27                         500ul% H  D3 n  t/ h; w
PD                           25ul( s, {, U5 M& }: b! h$ q+ z
CHIR                         25ul! f& m2 M( G  }# O
1000 units/ml lif               5ul  ?/ L. @4 s; r
状态很好

sszxlijin

DMEM（高糖）
1 p! P; d1 Y  UFBS6 t) P; d' G4 ]& y' Q) n
L-glutamine      
) \- b# ^9 [6 k1 ^7 T; ?1 VNEAA               
' o/ o% S8 L9 qpenicillin/streptomycin   
/ A- c& }0 a2 c3 s2-mercaptoethanol     
* r0 o# E7 }2 K/ k. N1000 units/ml lif               
& k. B, C( q7 s; ?0 A9 I养在明胶包被板上，我养的是E14和R1  效果挺好的

kasaya

再贡献一个" A, j1 c5 z* s0 y
ES medium                                        100 ml
" |$ t. |; x+ E3 y8 fDMEM (Specialty media, SLM-220-M) 80 ml , q1 X. Y' R) b. U5 E3 u
FBS (Hyclone, SH30071.03)              15 ml % E! T6 }3 b0 g/ q5 ?
Pen/Strep (100X, Specialty media, TMS-AB-2C) 1 ml （不加也行的，但是建系时要检测支原体）: J. m1 J2 g/ [, y6 S+ s
L-glutamine (100X, Specialty media, TMS-002-C) 1 ml
$ _, V/ U" B% G5 h( aNonessential amino acids (100X, Specialty media, TMS-001-C) 1 ml
1 F: O/ Q2 {2 |7 K+ lNucleosides for ES cells (100X, Specialty media, ES-008-D) 1 ml
+ E9 C" q2 L; n9 Q% f( x2-mercaptoethanol (100X, Specialty media, ES-007-E) 1 ml
# O6 E* s) _- z) x( H3 Q4 fLIF (ESGRO, GIBCO 13275-029) 10 μl
5 D: e& f- y6 B- g( P% lPD0325901 MEK inhibitor(10mM Stemgent, 04-0006)         10μl     (1μM)8 H4 q6 z4 k; U" ]+ `6 W
CHIR99021 GSK3βinhibitor(10mM Stemgent, 04-0004)         30μl     (3μM)! A. o6 [2 Q. J4 \3 E6 t

. y5 K3 M5 B* b& x小鼠ES不用feeder也会长得很好的。如果不加2i也行，就是有些克隆容易分化。

flyjing

谢谢各位，我要分离小鼠原代胚胎干细胞，不用饲养层，分离出囊胚之后，该用什么方法得到胚胎干细胞呢，不胜感激