关于悬浮成球培养

limeiying

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悬浮培养中既有细胞球也有单细胞，其中细胞球直径为30um左右，请教：有没有好的方法能把多数细胞球分离出来？

仰天

我做的原代培养是贴壁细胞，也想请教一下怎样把多数的细胞球分离出来，谢谢！

shaozi402

差速沉淀法可以试一下
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深海寂寞鱼

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回复 limeiying 的帖子5 A) @4 l" {2 `

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2 z6 |5 ]; F; B   To limeiying :* k% j* Y* Y: O8 G. q" ]

- a1 ~! N7 O1 M. r0 W   1. 如果细胞球的数量比较多的话，建议你试试shaozi402战友说的差速沉淀法。  W& c% A3 }8 c7 [+ G& M
       即，将培养物转移到15 ml离心管中，静置3-5分钟，你可以看到细胞球明显的向离心管底部聚集。然后用移液管轻轻吸去培养基，仅留下底部少量的培养基。
& X1 J2 U- @  E: H/ I       这样可以富集细胞球，而去除部分单细胞。优点是简单易行，可以富集多数细胞球。缺点是纯度不够，依旧会有少量的单细胞，也会丢失一些细胞球。0 r" r; r2 Q* y5 }+ s- X
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    2. 如果细胞球不多，或者需要的细胞球可以不用特别多，那么你可以尝试将倒置显微镜（或者体视镜）放到超净工作台内，用2-20ul的移液器配200ul的黄枪头在显微镜下直接吸取细胞球（或者用口吸针直接吸取细胞球），转移至新的培养基中。" K7 j7 a+ q' D8 \7 S! [( w
       这样的优点是纯度比较高。缺点是通量很低，且需要一定的操作熟练度。不过只要练习自己就能够掌握的。
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( |8 Z. l( F; {3 n    3. 听之任之，放在培养箱里继续培养。这些增殖能力差，或者压根不能形成细胞球的单个细胞自然会死掉或者被稀释掉。随着你传代培养，细胞球会自然被富集。
% H- i8 z5 }. {1 l9 J; J+ f       其实你在培养中也会发现每次传代后，都会新产生这种单细胞。所以只要不影响实验结果，不要太在意。
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! T0 Z& H. v, u% m    以上仅仅是我的一些个人感受，未必符合你的实际情况。欢迎多多交流，共同进步！- J% k6 P1 ]" r
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tiramisu

可以用差速贴壁法先去除原代消化后的成纤维细胞，接下来的可以继续培养，大多数的细胞在无血清的培养条件下一周左右会死亡，等一定细胞数量之后传代就会分选出一部份单细胞，或者流式分选出目的细胞再继续培养，免疫荧光染色干性基因分选。之前有在一篇文献上看到具有干性的细胞在消化成单个细胞之后还具有二次或三次成球的能力，但是我还没有做到这部分，不确定这个说话对不对，仅供给你参考。

sycdegcb

楼主可以试试静置沉降法：混匀细胞球和单细胞悬液，静置1-3分钟，观察离心管底部有成片细胞球而单细胞仍悬浮时吸走上清液（尽量避免吸走细胞球），如此重复2-3次可以简单纯化下，省时简便。+ o; \$ o: G( _/ @4 W& ~1 }6 m7 S$ d
还有不知楼主是培养原代还是传代培养，我一直在培养小鼠皮肤干细胞，也是悬浮培养干细胞球。一般原代培养时，除了干细胞球还有好多单细胞，但是传代1-2次以后，单细胞就很少，培养悬液中大部分是细胞球。

碧螺春的秋天

消化后先悬滴培养两天，再吹下悬浮培养，可以使球大小一致

gh2010

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* U% _# |  z' V$ C. I' _, L1，用40um的cell strainer 过滤, BD的$ {! a. K: L' X4 ~0 ?2 T; o9 s: y% W
2，放在小平皿在解剖镜下挑出来，用10ul的枪头

xunway

问个 外行的 话了 : _- Z( u- D- d( r! `* Q
细胞 培养 一般不是每个 细胞 分散了更好吗 ?4 J' X7 i3 K9 X8 B
还非要成球培养 ! m; b7 q( ~/ |5 b
成球的话 球中心的细胞 被包裹的话 无法吸收丰富的营养 不是更难长好 存活7 S0 o3 ~7 s: q; ?% V1 U
5 L# [3 G8 k  s
我们一般是想办法让细胞分散呢
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+ S+ j# v* P: C) t# q8 V让细胞分散的话 各个试剂公司 都有分散试剂卖的
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我估计也有聚集的试剂卖的 # D- j; ]% \8 i% E5 B. {4 ?/ ~2 P

' Y6 q3 L6 N' h- W至于分离吗 过滤 的方法  很快的 操作简便  效率高