IPS免疫荧光染色图片疑惑求解

yuri.2004

各位前辈，小弟此前做免疫荧光实验，荧光染色在目镜中很正常，可是用显微镜自带软件拍照后出现异常的现象，边上一圈颜色变成金色了。调整拍照参数，此现象不能很好避免。请问这是什么原因造成的？我做的是IPS标志物复染，此图为细胞核DAPI染色。。求帮助解答，谢谢~' E; t* }1 c! l0 D' @. b/ a9 m  Y: W

2014-5-27 09:43 上传

下载附件 (221.16 KB)
IPS DAPI核染图

" M. o6 ^6 N. Z, W3 H, F我用的DAPI是SIGMA的F6057  
& r  I+ Y3 v" p( \

scottist

如果是人的ips，那么应该是一个出现分化的克隆了，正常的hiPSC克隆边缘比较平滑，不会出现上图中的很多触角的形状，所以对于这样出现一个分化的克隆，不知道还能否客观反应楼主想检测的指标。

yuri.2004

回复 scottist 的帖子* V7 D7 S- ^$ Q3 r7 ^
  Q' Z; a& C' }( w
谢谢你，这个是复染图中的DAPI核染图。。相同位置，我有拍摄细胞表面、胞内标志物的荧光染色图，证明细胞都是表达这些的。。。用到了OCT4 和TRA-1-60.不知能否解答下我这个图的问题呢？？荧光强度太大？还是曝光、拍照时候参数设置的问题？

scottist

回复 yuri.2004 的帖子; i+ r$ u  b: d2 f
) d  J( q/ ?# L6 x+ h
如果是复染，那么红色荧光和绿色荧光重叠以后就应该是黄色，但和你图中要表示的内容似乎不一致，所以可以考虑是不是拍摄过程中参数设置的问题。

yuri.2004

回复 scottist 的帖子
; Q" U5 |6 ~/ l8 V# [+ m5 ~
5 X# ^+ N% A5 Z呃~我们用的不是共聚焦荧光显微镜。。。是要切换滤光片模块的。最后通过软件把三种颜色的图Merge到一个图去。。。这个不是最终的叠加复染图。。这个是紫外滤光片条件下拍的，只针对DAPI一种物质。

scottist

回复 yuri.2004 的帖子
3 D. H( e0 D8 a. {4 E/ t- z1 s% h- ^5 @
那估计是曝光有些过度了，调整下参数设置、曝光时间，再试试，祝好运。

青云之上

你注意没，不光是边上，其实中间也有，只是比较分散，不知道你们滤光片和遮光板是不是好的，你检查下，另外你拍荧光的时候把白光关了试试，不要用挡光板，再一个就是你曝光时间太久了，调小点~~~

yuri.2004

回复 scottist 的帖子4 ]% P3 @3 N6 u, g: {- n' j- e4 P

$ S+ D+ C6 C0 I谢谢帮助，我再试试吧。~~

yuri.2004

回复 青云之上 的帖子$ \: i, i. M  u+ I2 I6 O; l

1 o8 `, r; Z8 e2 B4 O  y好的，我下次做的时候试试。。谢谢~~