2014年 Nature scientific reports上的一篇关于“重组蛋白诱导iPSCs”的读后感

xray19

wanglimaomao 发表于 2014-4-1 17:02
% J* L* h4 \/ e' j我对蛋白重编程不是很了解。但是针对不能扩增传代有点想法。也不一定正确，欢迎批评指正。首先体外合成的蛋 ...

) A: U5 l( N' ]* g8 Q1 b0 a
即便将4个基因整合到基因组中，当细胞向ipsc转化过程中，外源表达的基因会逐渐被沉默的，直至最后完全沉默。与此同时，细胞内源性的干性基因会逐渐获得表达。

xray19

感谢楼主，我也提供一篇protein transduction induced ipsc 的文章，供大家讨论

Andyhigh

xray19 发表于 2014-4-5 23:06 - w& P& w0 g, F% t' s
感谢楼主，我也提供一篇protein transduction induced ipsc 的文章，供大家讨论

; O2 o' o- [' v: O最好上传下文章！！！

xray19

4 \  i1 ^, @4 h* T' O+ l. h# }* i不好意思，昨天没上传上去

Andyhigh

xray19 发表于 2014-4-6 11:56 3 _$ h9 Z) s" q. T
不好意思，昨天没上传上去

; X5 R0 Y1 ]$ a- P7 c3 F! E3 Z, z您是本文作者嘛，很希望您能对本篇文章进行总结和评价！
+ |. X  ]% U/ n3 J" s1 y- ~1 G我刚大致看了下，这里与大家分享下我的看法，希望能起到抛砖引玉的作用。
% c6 s# m) t7 g* ~& Z/ c
$ U3 o/ R, R& m* `1. 刚打开文献，查了下杂志的IF，并以为是一篇用4因子（OSNL）诱导鸡体细胞重编程的文章，但看过摘要后发现自己错了，这是一篇”利用重组蛋白探索鸡ESCs 培养体系“的文章，文章具有较好的创新性，给了我一些启发，如在 用蛋白介导体细胞重编程后，是否可以利用重组蛋白 一直维持干细胞的多能性，甚至创建一种新物种ESCs的培养体系，值得尝试。
0 t: [- f5 R( D) H. P
! T- e% x# X0 t5 e2. 文章的思路: A. 用EGFP验证9R的功能； B. 国建pCMV-PF-9R-IRES-EGFP载体，瞬时转染293FT细胞，提取蛋白并浓缩； C. 加到鸡ESCs培养体系中，观察传代次数（一系列的检测指标），发现重组蛋白能抑制鸡ESCs的分化，能在体外维持ESCs的多能性' O0 M) \( T( p# k8 C
* v: r. t2 N0 b; }! j; l
3. 有一些疑问:  目前哪些物种获得了可以再体外长期传代的ESCs，求高手指教！！！另外文章中超声破碎细胞时的溶液是什么，还有转染效率怎么样（出现绿色的时间和比例，质粒应该没有线性化吧）这点自己比较感兴趣，希望Xray19能告知
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0 U: {7 Q, b9 l8 A4. 文章整体比较简单，不过也是一个完整的Story，自己推测应该是一名研究生做的工作。顶一个
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xray19

回复 Andyhigh 的帖子
3 \/ h0 v6 G+ i" b  J4 h$ h9 }) |; u0 F- Y
楼主好厉害。我不是作者，把文章down下来一直在偷懒没有看，还搞错了文章内容，真的好惭愧。。。。* g9 L, I& j: S/ M, V8 s
先不说话，赶紧看文章: M9 t7 U2 I, `$ a6 U5 X

7 \' i% K* }! Z

xray19

Andyhigh 发表于 2014-4-6 15:17
1 z: P! }  d1 A; Q您是本文作者嘛，很希望您能对本篇文章进行总结和评价！* A( w" n% i; l
我刚大致看了下，这里与大家分享下我的看法，希 ...

0 j; L( m, x5 L+ y# e% X
实在汗呐，下了文章后匆匆瞄了一眼摘要，跟Andyhigh一样，一开始也以为是用四因子蛋白诱导鸡细胞重编程的。大家都在热火火的用转导肽介导四因子造ipsc，这篇文章的作者反其道而行之，由此想到利用转导肽融合的干性因子去阻止鸡ESC在传代过程中多能性丢失，这是做ESC培养基研发的节奏啊。Andyhigh兄已经对文章评价的非常到位了，不多说了。
$ ~, H" p1 k6 k$ q7 R+ {$ b文中中超声破碎细胞的溶液应该是PBS吧（cells were washed twice with PBS and then ultrasonically disrupted），若有其它特殊的缓冲液应该会在方法中说明的。: Q  ?3 |( z# D1 L
293FT的转染效率，文章中也没说，但我利用lip2000转染过293FT（文章用的磷酸钙沉淀），效率超高，90%以上了，24小时的GFP几乎就全亮了，48小时达顶峰。' u  }' q5 i7 J) H
质粒线性化主要是为了稳定细胞系筛选时便于DNA片段插入基因组，瞬时表达时对转染效率和表达量并无助力，所以文章中估计没有线性化。
6 e9 x% ]) _2 |1 _人和小鼠的ESC是有可长期传代的细胞系的，这个大家估计都知道，置于其它的俺是小白，就不清楚了。倒是可以查下大鼠，果蝇，猪和牛是否有ESC细胞系。

Andyhigh

回复 xray19 的帖子# K: q' I/ M- H1 k8 m
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大鼠的ESCs及培养体系有，猪ESCs也有，但是缺乏培养体系，其他的不太确定，估计绝大部分都没有公认的培养体系。

xray19

回复 Andyhigh 的帖子- i2 F8 _, v/ d0 x

3 j7 W3 p9 d- M% h* N权限不够，还加不了好友。有机会多就ips 聊聊