复苏胚胎干细胞异常！！！！求助

xuehu20

冻存复苏后的胚胎干细胞形态异常，分析原因无解，求大牛帮忙解决问题！

孙帅帅

可能原因：+ J. @6 d% d& A5 d1 k' j; I
（1）、EDTA消化时间过长，对细胞损伤太严重；- U5 u+ A( w+ K$ h
（2）、冻存时细胞吹的太狠，把细胞都吹成单个细胞了；+ K: c- s2 D; Q8 b% @  Q: X
（3）、有可能就是细胞种子本身就不是很好0 C; M4 p+ j8 V

xuehu20

回复 孙帅帅 的帖子3 }9 n+ W! c  R, |# F9 t

# Y7 t  n6 |8 h' p. S$ J消化时间都和之前的一样，就是复苏的时候有时候很好，有时候就是现在的结果，操作什么的都没有改变过

xuehu20

回复 加拿大STEMCELL 的帖子9 s- j3 [0 v) ?7 G5 C

0 c9 U9 M1 o3 Q" A4 t冻存前的状态很正常啊，培养基是自己配的，之前一直用，培养效果没有问题的，消化的时候用的是EDTA,就是复苏的时候有时复苏结果很好，有时候就是现在的样子，不稳定啊，纠结。。。。

gghywtfz

2 ~) j6 d7 l( C: i! b

xuehu20 发表于 2014-3-20 16:37 * m4 w/ D- t5 e2 J6 ?% j5 H9 O
回复 加拿大STEMCELL 的帖子* \' U: E1 r& N+ f) g' [6 J
& x- [9 v& b; u' ~2 l" A+ b, \0 h1 c
冻存前的状态很正常啊，培养基是自己配的，之前一直用，培养效果没有问题的， ...

/ [& C- O0 a3 F
, ^2 h, x1 O0 ?( s9 A9 h
其实自己配的培养基里含血清，如果批次不是很好的话，会引起细胞容易分化。$ L3 _& }; l( c  N9 {0 b

7 l: o  {& {2 E' d9 a# d! M# S其次的话，冻存的细胞团块大小建议大一些，看你图上的细胞团好像很小的样子，而且密度也很低，不知道是复苏以后第几天时候的细胞？

Jonathan

回复 xuehu20 的帖子
1 }( I( G  L' U6 \7 g& ]% n$ n' T4 ~" |
H9？

wangshumin12311

你这细胞没有问题，刚复苏有的时候冻存效率低或者细胞冻的少，克隆小就这样，这应该是人的ESCs，不会像mESCs那么强悍，长大了就没问题，放心的养，，，冻多些，复苏加点rock inhibitor
* c  ^) a; K# ~; H) X9 Z( S

紫电苍炎

个人感觉你这会不会是接种密度过稀，导致的？
4 |9 z4 L& @. {! j7 z7 z  c
: H: Z+ l4 X5 U

xuehu20

回复 Jonathan 的帖子" C' Z2 H5 ~7 R

  l. r& ], ^; t; {6 n是H1呢