关于黑胶虫的问题

指下人生

关黑胶虫 求助

孙帅帅

     黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。7 \+ G# h! A( W# T. l$ C
     细胞培养的时候，有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动，小黑点有时呈点状，有时呈小的片状，运动形式为在原地振动（类似布朗运动），这种小黑点既不是细菌、霉菌，也不是支原体（我们曾经请周守长用血平板培养过，没有菌落出现），目前业内人士称其为“黑胶虫”。
& M1 r' w! w2 O2 Y) f     黑胶虫到底是否为生物？这个一直是业内人士的疑惑。黑胶虫一般是存在血清里的，而血清通常是经过0.1μm滤膜过滤的,所以血清里不可能存在细菌、霉菌及支原体等微生物。如果说黑胶虫不是生物，它会不断增多，达到一定数量时会与细胞竞争性生长，与细胞竞争培养基中的营养，从而使得细胞营养不足而死亡。

月_幻影

“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。
1 J9 s2 ^) K/ Y4 x) T% S- O  [& }“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。& k1 {' i. l- O9 B/ s) }  f
目前比较公认的观点认为“黑胶虫”是一种微生物，增殖缓慢但对细胞有损害，数量达到一定程度可引起细胞死亡，其来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的。该污染在全世界细胞实验室中普遍存在，解决该问题是一个世界性难题' K. ]8 U% @$ z- p7 p- ?
关于是什么的问题的讨论
5 E' _: w7 T+ \A.  玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西（曾经有文献报道过）
- L6 b( _' `/ p! n  H; cB.  据说这是黑胶虫，又有人说是原生动物，好象也没个统一的说法* C( {( O, J- [# A
C.  据病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫，似乎和草履虫和变形虫有类似之处，然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。* m6 [2 d$ t, v5 h% m0 a
D.  有人说是纳米级的细菌. k( R* c9 _( X8 ]; P* W; l, n# U" ~
其他的特点- p# Z$ t: D8 k0 A
（1）形态上有些像细菌，直径约在0.5~1微米，& z1 ~/ r) z' ]+ A, D( l& d1 D
（2） 在400X倒置显微镜小，有典型的布朗运动（不规则的原地小距离抖动）。
3 e; g/ X9 Z8 S5 S/ B1 r; Y! ?8 j+ U（3） 细胞内好像也有存在，
8 Q, @$ B8 T% W% S) l5 ?（4） 但并不引起培养液混浊/ w# i# m- \! n' i$ j2 \6 ^& e
（5） 时间稍长，细胞状态明显恶化，并最后死亡
; Z# h2 @$ C2 M& F大家的处理：% A: I# i; r& v5 C4 A
1.换好一点的血清（我觉着和血清的关系不大）。
( I% `6 ~6 ^. Q. k2.如果是贴壁细胞的话，可用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解。若是悬浮的话，就不太好处理拉，可以向其中少加一点滋养细胞（从小鼠腹腔内取的巨噬细胞，这种细胞不分裂，过一阵就死掉了，做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道）。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效！还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度。
: }- l6 m6 Z* a# w+ F; K5 o& R( F3.换用进口的一次性塑料培养瓶。7 q  P# g* t- h- E" h; u: a) K
4.建议清理无菌室所有物品，重新灭菌，用KMnO4熏蒸，按首次使用无菌室做，细胞重新复苏，。
7 O5 Y8 \4 {" `0 Q( Y5. 在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打，冲洗干净后再加入培养液，坚持天天洗，传代时加生理盐水再离心一次，接种密度稍大一些，一段时间后，虫子就会大大减少，对细胞的生长也不会有大的影响。
% K! b$ t, E& \% z: l0 c) l6.有材料称minocycline具有一定的作用，可以和换液结合起来使用。( Z* ^* h7 _: r* w
以上是在网上看到材料，另外我还看到过如下的解释：2 B0 [4 R/ i/ g$ B1 k' i
黑胶虫即显微镜下观察到的“小黑点”，通常经过热处理的血清，沈淀物的形成会显著的增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”，常会误认为血清遭受污染，也就是我们所认为的黑胶虫吧，而将血清放在37℃中欲培养此“微生物“，但在37℃环境下，又会使此沈淀物增多，更会误认为它在增殖，但以培养细菌的培养基检测，又没有污染。所以所谓的“黑胶虫”很有可能只是血清中的产生的沉淀物。* @# g: s2 Q0 t# a+ p" u6 T

刘慧瑾

这个确实是会越长越多，最后细胞无法生长下去

zhzliang

大多数情况下，就是由于操作不慎而交叉污染的带抗性的大肠肝菌，尤其是人多的实验室容易出现。霉菌污染的情况也有，但比较少见，因为生长速度较慢，短期内不容易判断，大都是实验室有人做酵母双杂交的时候会出现。也有单细胞原生动物污染的情况，那一般都是细胞自身带来的。

jxydiandian

不知道你是想问解决方法还是只是名词解释，如果你是做单纯的做科研，黑胶虫一般不会影响实验，如果你想做临床，最好灭活后使用，我们之前有一次只是做实验，没有灭活，出现过黑胶虫。

sc-cxw

从外周血或者脐血中分离单个核细胞时，分离结束在显微镜下观察，也经常会有黑胶虫。

sycdegcb

我养皮肤干细胞时碰上几次“黑胶虫”污染，第一天正常，第二天培养液会发黄，浑浊。400倍观察密密麻麻全是小虫子一样的东西。至于造成污染的原因我的经验是细胞材料没有处理干净，用加双抗的PBS多洗，我的皮肤块直接泡在酒精里，加上操作注意些基本可以避免。

仰天

以前培养细胞遇到过几次黑胶虫污染，如果发现的早用含双抗的PBS冲洗几次，细胞继续培养后镜下不会再有黑胶虫；不过发现的晚的话细胞就很难救回来了。现在培养细胞都是用含双抗的培养基，没有再发现污染。