请教怎么分离小鼠囊胚的TE细胞

wxl87

请教，分离小鼠囊胚的TE单个细胞

lidd14

囊胚发育晚期的滋养层细胞很容易消化成单个细胞，用0.2%的链酶蛋白酶处理5-10min,脱去透明度，然后再置于0.25%的胰蛋白酶-0.04%EDTA中消化约5min，此时滋养层细胞开始脱落，剩下内细胞团，收集除内细胞团外的滋养层细胞。

wxl87

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哦，我有尝试胰酶消化的，放入胰酶后，囊胚就会变收缩成一团状。还有就是滋养层细胞用什么消化，我用0.25的胰酶没有消化开。不知道哪些地方没做好，还请指教、

lidd14

放入胰酶后，囊胚缩成一团是正常的，0.25的胰酶完全可以消化开，消化一段时间，待囊胚变软，用口吸管吹，滋养层细胞就会脱下来。

wxl87

回复 lidd14 的帖子. U6 N* b% D7 _* }1 G! o& f
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请问消化几分钟啊？变软是什么状态，消化的时候一直是蜷缩的吗？口吸管的口径是大于囊胚还是用小口径的？' s( v$ e0 R8 H3 C$ n. L
我有消化开，但是用的是小口径的口吸管然后就不好区分TE和ICM了。